Маҷмӯаи Cell Direct RT qPCR — Такмани мустақими ҳуҷайраҳои лизиси ҳуҷайра барои як қадами омода маҷмӯаҳои qRT-PCR
Тавсифҳо
Ин маҳсулот системаи беназири буферии лизисро истифода мебарад, то РНК-ро аз намунаҳои ҳуҷайраҳои парваришшуда барои реаксияҳои RT-qPCR зуд озод кунад, раванди тозакунии вақти зиёд ва заҳматталаби РНК-ро аз байн мебарад ва ҳамагӣ 7 дақиқа барои ба даст овардани қолаби зарурии РНК бо 5× Direct Mix RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman, ки аз ҷониби PCR зуд ва самаранок ба даст оварда мешавад.
5× Direct RT Mix ва 2× Direct qPCR Mix-Taqman таҳаммулпазирии қавии ингибиторҳо доранд ва метавонанд бо истифода аз лизати намунае, ки ҳамчун қолаб чен карда мешавад, баръакс ва амплификацияи муассирро иҷро кунанд.Реагент дорои Транскриптазаи баръакси Foregene, Hot D-Taq DNA Polimerase, dNTPs, MgCl мебошад.2, Reaction Buffer, Optimizer PCR ва Stabilizer, ки бо буфери лизис барои зуд ва ба осонӣ ошкор кардани намунаҳо истифода мешаванд ва дорои хусусиятҳои ҳассосият, хосият ва устувории баланд мебошанд.
Мушаххасоти
200×20μл Rxns, 1000×20μl Rxns
Компонентҳои комплект
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Компонентҳои комплект Системаи реаксияи 20μl qPCR | DRT-01021 | DRT-01022 | Шарҳ | |
| 200 Т | 1000 Т | |||
|
Қисми I | Буфери CL | 4 мл | 20 мл | Лизиси ҳуҷайра |
| Foregene Protease Plus II | 80 мкл | 400 мкл | ||
| Буфери ST | 400 мкл | 1 мл × 2 | ||
|
Қисми II | ДНК хаткӯркунак | 80 мкл | 400 мкл | |
| 5 × Mix Direct RT * | 160 мкл | 800 мкл | RT | |
| 2× мустақими qPCR Mix-Taqman * | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 | qPCR | |
| 20 × Ранги истинод | 40 мкл | 200 мкл | ||
| RNase-Free ddH2O | 1,7 мл | 10 мл | ||
| Дастури дастурӣ | 1 дона | 1 дона | ||
*:Cell Lysis, 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman -ро алоҳида харидан мумкин аст
Хусусиятҳо ва афзалиятҳо
■Содда ва самаранок: бо технологияи Cell Direct RT, намунаҳои РНК-ро ҳамагӣ дар 7 дақиқа ба даст овардан мумкин аст.
■ Талаботи намунавӣ хурд аст, то 10 ҳуҷайраро санҷидан мумкин аст.
■ Қобилияти баланд: он метавонад РНК-ро дар ҳуҷайраҳои дар 384, 96, 24, 12, 6-чоҳҳо парваришшуда зуд муайян кунад.
■ DNA Eraser метавонад геномҳои озодшударо зуд тоза кунад ва таъсирро ба натиҷаҳои минбаъдаи таҷрибавӣ хеле кам кунад.
■ Системаи оптимизатсияшудаи RT ва qPCR транскрипсияи баръакси ду марҳилаи RT-PCR-ро самараноктар ва PCR-ро мушаххастар ва ба ингибиторҳои реаксияи RT-qPCR тобовартар мекунад.
Аризаи маҷмӯа
Доираи татбиқ: ҳуҷайраҳои парваришшуда.
- РНК тавассути лизиси намуна бароварда шудааст: танҳо ба қолаби RT-qPCR ин маҷмӯа татбиқ мешавад.
- Маҷмӯаро барои мақсадҳои зерин истифода бурдан мумкин аст: таҳлили ифодаи генҳо, санҷиши таъсири хомӯшкунии генҳои siRNA, скрининги маводи мухаддир ва ғайра.
Нигоҳдорӣ ва мӯҳлати нигоҳдорӣ
Қисми I ин маҷмӯа бояд дар 4 нигоҳ дошта шавад℃;Қисми II бояд дар -20 ℃ нигоҳ дошта шавад.
Foregene Protease Plus II бояд дар 4 дараҷа нигоҳ дошта шавад℃, дар -20 ℃ ях накунед.
Реактив 2×qPCR Mix-Taqman мустақим бояд дар -20 нигоҳ дошта шавад℃дар торикӣ;агар зуд-зуд истифода бурда шавад, он метавонад дар 4 нигоҳ дошта шавад℃ барои нигоҳдории кӯтоҳмуддат (дар давоми 10 рӯз истифода мешавад).
Принсипҳои тарроҳии праймери PCR дар вақти воқеӣ
Праймери пеш ва праймери баръакс
Барои PCR Real Time тарҳрезии праймер хеле муҳим аст.Примерҳо ба хусусият ва самаранокии пурқувваткунии PCR алоқаманданд ва метавонанд бо истинод ба принсипҳои зерин тарҳрезӣ шаванд:
- Дарозии ибтидоӣ: 18-30bp.
- Мазмуни GC: 40-60%.
- Арзиши Tm: Нармафзори тарроҳии Primer, ба монанди Primer 5, метавонад арзиши Tm-и праймерро диҳад.Қиматҳои Tm-и праймерҳои боло ва поён бояд ба қадри имкон наздик бошанд.Формулаи ҳисобкунии Tm низ метавонад истифода шавад: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Ҳангоми иҷрои ПЗР, одатан ҳамчун ҳарорати гармкунӣ ҳарорат аз арзиши ибтидоии Tm аз 5 °C интихоб карда мешавад (афзоиши мувофиқ дар ҳарорати гармкунӣ метавонад хусусияти реаксияи ПЗР-ро зиёд кунад).
- Примерҳо ва маҳсулоти PCR:
- Дарозии маҳсулоти афзояндаи праймери тарроҳии PCR беҳтараш 100-150б.
- Праймерҳои тарроҳӣ дар минтақаи дуюмдараҷаи сохтории қолаб бояд то ҳадди имкон пешгирӣ карда шаванд.
- Аз ташаккули 2 ё зиёда пойгоҳҳои иловагӣ дар байни 3′ охири праймерҳои болооб ва поёноб канорагирӣ кунед.
- Пойгоҳи терминали Primer 3' наметавонад бо 3 пайдарпайи G ё C мавҷуд бошад.
- Худи праймерҳо наметавонанд сохторҳои иловагиро дошта бошанд, вагарна сохтори мӯй ба вуҷуд меояд, ки ба тақвияти PCR таъсир мерасонад.
- ATCG бояд ба қадри имкон дар пайдарпаии ибтидоӣ тақсим карда шавад ва аз пойгоҳи терминали 3' бояд ҳамчун T пешгирӣ карда шавад.
Замима1:Cell DirectRT-qPCR Маҷмӯаи компонентт бастаи иловагӣ
1. Маҳлули лизиси ҳуҷайра
| Маҳлули лизиси ҳуҷайра | |||
| Компонентҳои комплект (24-чоҳ системаи лизис / чоҳ) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Т | 500 Т | ||
| ҚисмиИ | Буфери CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| Буфери ST | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| ҚисмиII | ДНК хаткӯркунак | 400 мкл | 1 мл × 2 |
| RT Mix | |
| Компонентҳои комплект (Системаи реаксия 20 мкл) | DRT-01011-B1 |
| 200 Т | |
| 5 × Омехтаи мустақими RT | 800 мкл |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 мл × 2 |
| qPCR омехта | ||
| Компонентҳои комплект (Системаи реаксия 20 мкл) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 Т | 1000 Т | |
| 2 × мустақими qPCR Mix-Taqman | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 20 × Ранги истинод ROX | 40 мкл | 200 мкл |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 мл | 10 мл |
Дастурҳои дастурӣ:
