Муқаддима:

РНК, номи илмии кислотаи рибонуклеинӣ, ихтисораи он аз кислотаи RiboNucleic гирифта шудааст, як навъи кислотаи нуклеинӣ мебошад, ки тавассути пайваст кардани ҳадди аққал даҳҳо рибонуклеотидҳо тавассути пайвандҳои фосфодиэстер ба вуҷуд меояд.

Ҳадафи таҳқиқи РНК ин истихроҷи умумии РНК-и бе ифлосшавӣ мебошад ва принсипи асосии истихроҷи РНК-ро метавон тақрибан ба таври зерин ҷамъбаст кард:

1. Аввал ҳуҷайраҳоро вайрон кунед

2. Пас аз он олудаҳои макромолекулярӣ (сафедаҳо, липидҳо, ДНК ва ғайра) хориҷ карда шаванд.

3. Ниҳоят, РНК ҳангоми тоза кардани намакҳо ва ҳалкунандаҳои органикӣ ва минбаъд тоза кардани РНК боришот мешавад.

Гузашта ва ҳозираи усули истихроҷ

Насли якуми усули истихроҷи РНК усули боришоти ТРИзол мебошад (реактивҳои истифодашуда аз гуанидин изотиоцианати, фенол, хлороформ ва ғайра) аз ҷониби бобои Пиотр Чомчински ва бибии Николетта Сакки ихтироъ шудаанд, зеро ин ихтироъ имкон медиҳад истихроҷи РНК зуд ва осон, аз он вақт инҷониб таҳқиқоти RNA оғоз ёфт.

Баъдтар, Бобо ин патентро ба Invitrogen фурӯхт ва Invitrogen ин усулро дар ҷаҳон таблиғ кард ва ба усули васеъ истифодашаванда табдил ёфт.

Баъдтар, Invitrogen аз ҷониби Thermo харидорӣ карда шуд!

Маҳсулоти намояндагӣ: реагенти Invitrogen TRIzol

Бо вуҷуди ин, усули боришоти TRIzol боришот ва истихроҷи РНК-ро талаб мекунад ва реагентҳои истифодашуда заҳролуд ҳастанд ва барои кор вақти тӯлонӣ мегиранд.

Аз ин рӯ, усули тозакунии сутуни ферментҳои насли дуюм ба вуҷуд омад, ки бо истифода аз мембранаи силикагели ҳамчун маводи мушаххаси адсорбсияи кислотаи нуклеинӣ барои ба ҳадди аксар барқарор кардани РНК дар намуна ҳангоми тоза кардани дигар ифлосиҳо.

Усули насли дуюм амалиётро дар асоси фаъолияти устувор осон мекунад, омили хавфро коҳиш медиҳад ва самаранокии истихроҷи РНК-ро беҳтар мекунад.

Маҳсулоти намояндагӣ: QIAGEN RNeasy ва аксари маҳсулоти ватанӣ

Аммо, ҳам усулҳои насли якум ва ҳам дуюм истифодаи DNase-ро барои бартараф кардани ифлосшавии ДНК талаб мекунанд, ки барои таҷрибаҳои минбаъдаи поёноб каме нороҳатӣ меорад.DNase боқимонда самаранокии транскрипсияи баръаксро коҳиш медиҳад ва синтези аввалини cDNA-ро коҳиш медиҳад ва ба ин васила ба дурустии натиҷаҳо таъсир мерасонад.

Аз ин рӯ, усули истихроҷи насли сеюм дар асоси насли дуюм оптимизатсия карда мешавад.Барои таҷриба илова кардани ягон фермент лозим нест ва РНК-ро танҳо бо ду сутун ба осонӣ ба даст овардан мумкин аст.

Сутуни 1: Сутуни тозакунии ДНК барои тоза кардани ДНК

Сутуни 2: Сутуни танҳо-РНК махсусан RNA-ро адсорб мекунад ва барқарор мекунад

Чунин амалиёти оддй на танхо вактро сарфа мекунад, балки кори тачрибахои поёнобро хам осон мекунад!

Маҳсулоти намояндагӣ: QIAGEN RNeasy Plus ваФориҷӣМаҳсулоти силсилаи тозакунии RNA

(RNeasy Plus)

（ForegeneМаҷмӯаи изолятсияи умумии РНК-и растанӣ)

Ба шумо оромона мегӯям!Маҷмӯаи RNA-и Foregene инчунин як RNase Eraser-и хеле осонро пешкаш мекунад, ки метавонад 400 мкг RNase-ро дар сатҳи сахт дар 1 дақиқа бидуни илова кардани ягон моддаи заҳролуд ба бадани инсон комилан тоза кунад!

Сурат1: Диаграммаи муқоисаи равандҳои амалиётӣ

Маҳсулоти Foregene метавонад истихроҷи РНК-ро танҳо дар ду суруд анҷом диҳад, дигаронро ба пешрафти таҷрибаи шумо ҳасад набаред!

Сурат2:Eнатиҷаҳои таҷрибавӣ диаграммаи муқоиса

Насли аввал (1: TRIzol)

Насли дуюм (2: RNeasy аз QIAGEN)

Насли сеюм (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Сурат3: Графикаи qPCR (графики каҷкунии тақвият)

Насли аввал (сабз маънои TRIzol -, сурх маънои TRIzol +)

Насли дуюм (кабуди осмон маънои QIAGEN RNeasy-, сурх маънои QIAGEN RNeasy +)

Насли сеюм (кабуд маънои QIAGEN RNeasy plus, сабз маънои Foregene)

(Эзоҳ: Графикаи qPCR "-" нишон медиҳад, ки DNase илова нашудааст ва ифлосшавии ДНК хориҷ карда нашудааст. Аз ин рӯ, CT баландтар аст ва натиҷа дақиқ нест; "+" нишон медиҳад, ки DNase илова карда шудааст ва ифлосшавии ДНК хориҷ карда шудааст, натиҷа дақиқ аст)

Ҳар як навсозии техникӣ маънои онро дорад, ки амалиёти таҷриба дар самти соддатар ва барои истифодабарандагон осонтар инкишоф меёбад.

Foregene мақсад дорад, ки ба тадқиқотчиёни бештари илмӣ дар сарфа кардани вақт ва хароҷоти таҷрибавӣ, ба даст овардани натиҷаҳои босифати таҷрибавӣ ва якҷоя эҷод кардани дастовардҳои пурарзиши тадқиқоти илмӣ кӯмак расонад.