Таҳлили зерини мушкилоти эҳтимолӣ дарБуккалтампон/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Сутуни тозакунӣ баста шудааст

Дар ин маҷмӯа, дар амалиёти истихроҷи ДНК-и геномӣ, сутуни тозакунӣ мустақиман ба омехтаи лизиси ферментативии намуна бидуни қадами центрифугакунӣ адсорб мешавад ва сутуни тозакунӣ аз сабаби ферментизатсияи нопурра ва часпакии баланди намуна метавонад баста шавад.

Сабабҳои эҳтимолии зерин инҳоянд:

1. Ҳазми нопурраи ферментативии намунаҳои бофтаҳо.

Тавсия: Вақти коркарди намунаи Foregene Protease метавонад ба таври мувофиқ дароз карда шавад ё супернатант пас аз центрифуга дар 12,000 rpm (~ 13,400) гирифта шавад.× ж) 5 дақиқа.

2. Истифодаи аз ҳад зиёди намунаҳои бофтаҳо ё бофтаҳои калон.

Тавсия: Беҳтараш аз 1 зиёд набошадБуккал тампон дар намуна;агар намуна аз ҳад зиёд калон бошад, мутаносибан миқдори Buffer ST1, Foregene Protease, буфери ST2-ро зиёд кунед.

3. Часпакнокии намуна хеле баланд аст.

Тавсия: Намунаҳоро пеш аз истихроҷи ДНК-и геномӣ бо 10 мм Tris-HCl ба таври мувофиқ ҳал кардан мумкин аст.

4. Порчаҳои корти хун макканда шудаанд.

Тавсия: Вақти муваққатии центрифугакунии марҳилаи 6-и истихроҷи геномии доғи хун (FTA Card) метавонад ба таври мувофиқ дароз карда шавад.

Ҳосили паст ё набудани ДНК

Аксар вақт омилҳои мухталифе мавҷуданд, ки ба ҳосили геномии ДНК таъсир мерасонанд, аз ҷумла пайдоиши намуна, шароити нигоҳдории намуна, тайёр кардани намуна, коркард ва ғайра.

Ҳангоми истихроҷ ДНК-и геномиро ба даст овардан мумкин нест

Сабабҳои эҳтимолӣ инҳоянд:

1. Нигоҳдории нодурусти намунаҳо ё нигоҳдории аз ҳад зиёд ба таназзули геномии ДНК оварда мерасонад.

Тавсия: Тампонҳои шифоҳӣ бояд беҳтараш нав гирифта шаванд ва истифодаи тампонҳои ҳифзшуда барои амалиёти истихроҷи геномии ДНК тавсия дода намешавад;намунаҳои доғи хун бояд кафолат диҳанд, ки сифат мувофиқ аст ва мӯҳлати нигоҳдорӣ набояд аз ҳад зиёд дароз бошад.

2. Истифодаи хеле ками матоъ метавонад боиси истихроҷи ДНК-и геномии мувофиқ гардад.

Тавсия: риоя кунедбукаl дастур оид ба гирифтани намунаи тампон дар дастури амалиёт, ва ҳарчи бештар хушконед, то ҳуҷайраҳои кофӣ ба тампончаи даҳон барои истихроҷи ДНК геномӣ часпонида шаванд;барои истихроҷи намунаи доғи хун, майдони буридани доғи хунро ба таври мувофиқ зиёд кардан мумкин аст.

3. Foregene Protease нодуруст нигоҳ дошта мешавад, ки дар натиҷа фаъолияти он коҳиш меёбад ё ғайрифаъол мешавад.

Тавсия: Шартҳои нигоҳдории онро тасдиқ кунедФoregene Protease ё онро бо Foregene Protease нав барои реаксияи ферментативӣ иваз кунед.

4. Нигоҳдории нодурусти маҷмӯа ё вақти нигоҳдорӣ хеле тӯлонӣ аст, ки дар натиҷа баъзе ҷузъҳои комплект аз кор мебароянд.

Тавсия: Хариди навБуккал тампон ДНКҷудогона будан маҷмӯа барои расмиёти дахлдор.

5. Буфери БҶ этаноли мутлақ илова намекунад.

Тавсия: Тасдиқ кунед, ки буфери БҶ ҳаҷми дурусти этаноли мутлақро илова мекунад.

6. Элюент ба плёнкаи силикон дуруст илова карда нашудааст.

Тавсия: Иловаи 65°CЭлюенти қаблан гармшуда ба мобайни мембранаи силиконӣ меафтад ва дар ҳарорати хонагӣ барои 5 дақиқа мемонанд, то ки самаранокии элюсия баланд шавад.

LДНК-и геномии ҳосилнок ҷудошуда

Сабабҳои эҳтимолии зерин инҳоянд:

1. Нигоҳдории нодурусти намунаҳо ё нигоҳдории аз ҳад зиёд ба таназзули геномии ДНК оварда мерасонад.

Тавсия: Тампонҳои шифоҳӣ беҳтар намунаи нав гирифта мешаванд ва тампонҳои ҳифзшуда набояд барои истихроҷи геномии ДНК истифода шаванд.

2. Агар миқдори намунаи бофта хеле кам бошад, мундариҷаи ДНК-и геномии истихроҷшуда камтар хоҳад буд.

Тавсия: Дастурҳои гирифтани намунаи тампони шифоҳиро дар дастури амалиёт иҷро кунед ва ҳарчи бештари имкон тоза кунед, то ҳуҷайраҳои кофӣ ба тампони даҳон барои истихроҷи геномии ДНК часпонида шаванд.

3. Foregene Protease нодуруст нигоҳ дошта мешавад, ки дар натиҷа фаъолияти он коҳиш меёбад ё ғайрифаъол мешавад.

Тавсия: Шартҳои нигоҳдории онро тасдиқ кунедthe Foregene Protease ё иваз онро бо нав Foregene Protease барои реаксияи ферментативӣ.

4. Мушкилоти элуент.

Тавсия: Истифодаи Buffer EB барои элюсия;агар истифодаи ddH₂Эй ё дигар элюентҳо, тасдиқ кунед, ки рН-и элюат байни 7,0-8,5 аст.

5. Элюат ба қатра дуруст илова карда нашудааст.

Тавсия: Қатраҳои элюентро ба мобайни мембранаи силикон илова кунед ва дар ҳарорати хонагӣ барои 5 дақиқа тарк кунед, то ки самаранокии элюсия баланд шавад.

6. Моеъи элютсионӣ хеле кам ҷамъ мешавад.

Тавсия: Элюентро барои элюсияи геномии ДНК мувофиқи дастурҳо ҳадди аққал истифода баредкам не аз 15μl.

Lэй покӣ of ДНК геномӣҷудошуда

Покии пасти геномии ДНК метавонад ба нокомӣ ё натиҷаҳои ғайриқаноатбахши таҷрибаҳои поёноб оварда расонад, масалан: ферментҳоро кушода наметавонанд, PCR порчаи гени мавриди таваҷҷӯҳро ба даст оварда наметавонад ва ғайра.

Сабабҳои эҳтимолӣ инҳоянд:

1. Ифлосшавии гетеропротеинҳо, ифлосшавии РНК.

Таҳлил: Сутуни тозакунӣ бо истифода аз Buffer PW шуста нашудааст;сутуни шустани буферии PW бо истифода аз суръати дурусти центрифуга шуста нашудааст.

Тавсия: Боварӣ ҳосил кунед, ки пеш аз илова кардани этанол дар супернатант ҳеҷ гуна боришот нест;боварӣ ҳосил кунед, ки сутуни тозакуниро мувофиқи дастурҳо бишӯед ва ин қадамро партофтан мумкин нест.

2. ифлосшавии ионҳои наҷосат.

Таҳлил: Сутуни шустани буферии БҶ танҳо як маротиба хориҷ карда шуд ё шуста шуд, ки дар натиҷа олудашавии боқимондаи ионӣ шуд.

Тавсия: Боварӣ ҳосил кунед, ки Buffer WB-ро 2 маротиба шуста, то ҳадди имкон ионҳои боқимондаро тоза кунед.

3. Ифлосшавии ферментҳои РНК.

Таҳлил: RNases хориҷӣ ба буфер илова карда шуданд;Амали шустани буферии PW нодуруст буд, ки дар натиҷа боқимондаҳои RNase ба амал омада, ба амалиёти таҷрибавии РНК дар поёноб, ба монанди транскрипсияи in vitro, таъсир расониданд.

Тавсия: кислотаи нуклеинӣ силсилаи Foregeneизолямаҷмӯаҳо метавонанд РНК-ро бе иловаи иловагии RNase хориҷ кунанд,хамин тавр Swab buccal / FTA Card ДНК изолятсияи маҷмӯаилозим't илова RNase;итминон ҳосил кунед, ки дастурҳои сутуни тозакунии шустани буферии PW-ро риоя кунед ва ин қадамро фаромӯш кардан мумкин нест.

4. Бақияи этанол.

Таҳлил: Буфери ВБ пас аз шустани сутуни тозакунӣ центрифугаи холии найро анҷом надодааст.

Тавсия: Амалиёти дурусти центрифугакунии найчаи холиро мувофиқи дастурҳо иҷро кунед.

5. Дигар ифлосшавии наҷосат.

Таҳлил: Намунаҳои захирашуда ё намунаҳои махсус коркард карда намешаванд.

Тавсия: Намунаро мувофиқи дастур пешакӣ бодиққат коркард кунед.