Пешбарӣ

РНК-и дарозмуддати рамзгузорӣнашаванда, lncRNA як РНК-и рамзгузорӣнашаванда мебошад, ки дарозии зиёда аз 200 нуклеотид дорад, одатан дар байни 200-100000 nt.lncRNA ифодаи генҳоро дар сатҳи эпигенетикӣ, транскрипсия ва пас аз транскрипсия танзим мекунад ва дар хомӯш кардани хромосомаи X, импринтинги геном ва тағир додани хроматин, фаъолсозии транскрипсия, интерференсияи транскрипсия, интиқоли ядроӣ, танзими давраи ҳуҷайра, танзими тафриқаи ҳуҷайраҳо, танзими ҷубронкунии тафриқаи ҳуҷайраҳо ва бисёр равандҳои танзими вобаста ба дигар таъсироти муҳим ва ба ҳам алоқаманд (таъсири зиёд доранд) ба пайдоиш, инкишоф ва пешгирии беморињои инсонї бахшида шуда, дар айни замон яке аз мавзеъњои доѓи соњаи биотиббї мебошад.

01  Намудҳо ва хусусиятҳои LncRNA

lncRNA аз рӯи сарчашмаҳои гуногуни ташаккули он, тавре ки дар расми боло нишон дода шудааст, ба бисёр намудҳо тақсим мешавад.Хусусиятҳои зерин дорад:

1. lncRNAs одатан дарозтар буда, бо ифодаи динамикӣ ва усулҳои гуногуни пайвастшавӣ ҳангоми дифференсиатсия
2. Дар муқоиса бо генҳои рамзгузор, lncRNA одатан сатҳи ифодаи камтар дорад
3. Аксарияти lncRNA-ҳо дар раванди тафриқа ва рушди бофтаҳо хусусияти ифодаи вақтӣ ва фазоӣ доранд.
4. Дар варамхо ва дигар беморихо ифодахои хос мавчуданд
5. Ҷойгиршавии зерҳуҷайраҳои lncRNA гуногунанд
6. пайдарпаии нигоҳдорӣ паст аст, аммо функсия дараҷаи муайяни нигоҳдорӣ дорад ва ғ.

02 Саволҳои зуд-зуд пурсидашаванда дар бораи транскрипсияи баръакси LncRNA

Аз сабаби кам будани миқдори lncRNA дар ҳуҷайраҳо, дарозии дароз ва сохтори сатҳи баланд, чунин РНК аксар вақт дорои сохторҳои мураккаб ба монанди ҳалқаҳои поя ё мӯи мӯй ва RT-qPCR ба мушкилоти транскрипсияи баръакси номуваффақ ё самаранокии паст моил аст.

03 Маҳлули транскрипсияи баръакси LncRNA

Дар қоидаи марказӣ, раванди вирусҳои РНК бо истифода аз транскриптазаи баръакси худ барои синтез кардани ДНК бо истифода аз РНК ҳамчун қолаб транскрипсияи баръакс номида мешавад.Раванди истифодаи транскриптазаи баръакси вируси РНК барои синтез кардани қолаби cDNA дар vitro транскрипсияи баръакс номида мешавад.Унсурҳои асосие, ки ба системаи транскрипсияи баръакс дохил мешаванд: қолаби РНК, транскриптазаи баръакс, праймерҳо ва ҷузъҳои дигар.

1. Шаблон РНК

Таъсири қолаби РНК ба транскрипсияи баръакс дар сохтор, покӣ ва якпорчагии он инъикос меёбад.Чӣ қадаре ки покӣ ва якпорчагии РНК-и истихроҷшуда баланд бошад, ҳамон қадар самаранокии транскрипсияи баръакс баландтар ва натиҷаҳои минбаъдаи миқдорӣ дақиқтар мешаванд.РНК, ки бо реагентҳои истихроҷи РНК тоза карда мешавад, аксар вақт пасмондаҳои спирт ва намаки гуанидинро дар бар мегирад, ки ба аксари транскриптазаҳои баръакс таъсири қавӣ доранд.

2. Транскриптазаи баръакс

Транскриптазаи баръакс ба тамоми системаи транскрипсияи баръакс таъсири калидӣ дорад.Ҳарорати мувофиқ барои транскриптазаи баръакс, ки дар аксари лабораторияҳо истифода мешаванд, одатан 42 ° C аст.Дар асл, кушодани сохтори сатҳи баланди РНК ҳарорати баландтарро талаб мекунад ва талабот ба транскриптазаи баръакс баландтар аст.

3.Пример

Примерҳои транскрипсияи баръакс праймерҳои мушаххаси ген, праймерҳои тасодуфӣ ва праймерҳои Oligo dT мебошанд.Аксарияти lncRNA-ҳо думҳои polyA надоранд ва муҳим аст, ки бо праймерҳои тасодуфӣ бо Oligo dT мувофиқат кунанд.

4. Дигар ҷузъҳо

Бо дарназардошти он, ки РНК махсусан ба осонӣ вайрон карда мешавад, воридкунии ҷузъҳо дар системаи транскрипсияи баръакс метавонад кам карда шавад, ки метавонад воридшавии RNase-ро ба таври муассир пешгирӣ кунад ва пешрафти бефосилаи транскрипсияи баръаксро таъмин кунад.

Fорегеназ қолаби РНК, транскрипсияи баръакс ба qPCR мегирад

Муайянкунии lncRNA-и худро ҳамаҷониба ҳамроҳӣ кунед

Ҳайвоноти умумии RNA IҳалолМаҷмӯа (бо сутуни тозакунии gDNA)

Ҳуҷайраҳои умумии РНК IҳалолМаҷмӯа (бо сутуни тозакунии gDNA)

Lnc-RT HeroTM I(Бо gDNase)(Super Premix барои синтези аввалини cDNA аз lncRNA)

Дар вақти воқеӣ PCR EasyTM-SYBR Green I

Aафзалиятҳо ofистихроҷи РНК:

Маҷмӯа технологияи истихроҷи насли сеюми RNA-ро истифода мебарад, ба истифодаи DNase лозим нест.

11 дақиқа аз ҳуҷайраҳои фарҳангии 96, 24, 12 ва 6-чоҳ, истихроҷи самараноки RNA-и умумии ҳуҷайраҳои бе gDNA, тозагии баланд ва баландсифат.

Афзалиятҳои транскрипсияи баръакси lncRNA:

Системаи транскрипсияи баръакс, махсус барои LncRNA барои зуд бартараф кардани ифлосшавии геномии ДНК таҳия шудааст.

Системаи транскрипсияи баръакс устувории баланди гармӣ дорад ва ҳоло ҳам дар 50 ° C иҷрои хуби транскрипсияи баръакс дорад.

Шаблонҳои дорои мундариҷаи баланди GC ва сохтори мураккаби дуюмдараҷа метавонанд бо самаранокии баланд баргардонида шаванд.

Афзалиятҳоof qPCR:

Оғози гарми Foregene Taq Polymerase дорои самаранокии баландтари амплификация, ҳассосияти баландтари тақвият ва хосияти баландтари тақвиятдиҳӣ мебошад.

Миқёси оптимизатсияшудаи Real PCR Easy SYBR Green I-ро дорои ҳассосияти баландтари ошкор месозад ва шиддатнокии флуорессенси он нисбат ба маҳсулоти шабеҳ 3-5 маротиба аст, ки метавонад ниёзҳои намудҳои гуногуни таҷрибаҳои миқдорӣ флуоресцентиро қонеъ кунад.