Якчанд ихтироъҳои инқилобӣ дар таърихи технологияи ошкоркунӣ дар зеҳни ман технологияи аломатгузории иммунологӣ дар асоси принсипи ҳатмии мушаххаси антиген-антитело, технологияи PCR ва технологияи пайдарпайӣ мебошанд.Имрӯз мо дар бораи технологияи PCR сӯҳбат хоҳем кард.Мувофиқи таҳаввулоти технологияи PCR, одамон одатан технологияи PCR-ро ба се насл тақсим мекунанд: технологияи оддии PCR, технологияи флюоресцентии миқдорӣ дар вақти воқеӣ ва технологияи рақамии PCR.
Cтехникаи ommon PCR
КАРИ МУЛЛИС (1944.12.28-2019.8.7)
Кари Муллис реаксияи занҷири полимеразиро (реаксияи занҷири полимеразӣ, PCR) соли 1983 ихтироъ кард. Гуфта мешавад, ки ҳангоми рондани дӯстдухтараш ногаҳон илҳом пайдо кард ва дар бораи принсипи PCR (дар бораи манфиатҳои ронандагӣ) фикр кард.Кари Муллис дар соли 1993 ҷоизаи Нобел дар соҳаи химияро гирифт. The New York Times шарҳ дод: "Биологияро тақрибан ба давраҳои пеш аз PCR ва пас аз PCR тақсим мекунад.
Принсипи ПТР: Дар зери катализи полимерази ДНК, ДНК-и риштаи модарӣ ҳамчун қолаб истифода мешавад ва праймери мушаххас ҳамчун нуқтаи ибтидоии васеъ истифода мешавад ва риштаи духтари ДНК ба қолаби риштаи модар илова карда мешавад, дар in vitro тавассути денатуратсия, тозакунӣ, васеъшавӣ ва дигар марҳилаҳо нусхабардорӣ карда мешавад.Ин як технологияи амплификатсияи синтези ДНК дар in vitro мебошад, ки метавонад ҳама гуна ДНК-и мақсаднокро дар vitro зуд ва махсус тақвият диҳад.
Афзалиятҳои PCR оддӣ
1.Усули классикӣ, стандартҳои мукаммали байналмилалӣ ва дохилӣ
2.Арзиши пасти реактивҳои асбобҳо
3.Маҳсулоти PCR метавонад барои дигар таҷрибаҳои биологияи молекулавӣ барқарор карда шавад
Мошини тавсияшудаи PCR Foregene: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
Маҳсулоти марбут: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Камбудиҳои PCR оддӣ
1.ифлос кардан осон аст
2.амалиёти душвор
3.танҳо таҳлили сифатӣ
4.Ҳассосияти миёна
5.Амплификатсияи ғайримуқаррарӣ вуҷуд дорад ва вақте ки банди ғайримуқаррарӣ ба андозаи банди ҳадаф баробар аст, онро фарқ кардан мумкин нест.
CПТР дар асоси электрофорези апиллярӣ
Дар посух ба камбудиҳои ПТР оддӣ, баъзе истеҳсолкунандагон асбобҳоеро дар асоси принсипи электрофорези капиллярӣ ҷорӣ карданд.Қадами электрофорез пас аз тақвияти ПЗР дар капилляр ба анҷом мерасад.Ҳассосият баландтар аст ва фарқияти якчанд асосҳоро метавон фарқ кард ва тақвиятро тавассути MAERKER ҳисоб кард.мазмуни маҳсулот.Камбудӣ дар он аст, ки маҳсулоти PCR ҳанӯз бояд кушода ва ба асбоб ҷойгир карда шавад ва то ҳол хатари олудашавӣ вуҷуд дорад.
CапиллярӣEэлектрофорез
2. Технологияи флюоресцентии миқдорӣ дар вақти воқеӣ (Quantitative Real-time PCR, qPCR)ПЗР-и миқдорӣ флуоресцентӣ, ки онро низ Real-Time PCR меноманд, як технологияи нави миқдорӣ кислотаи нуклеинӣ мебошад, ки аз ҷониби PE (Перкин Элмер) дар соли 1995 таҳия шудааст. Таърихи рушди PCR миқдорӣ флуоресцентӣ таърихи муборизаҳои рӯҳии бузургҷуссаҳо ба монанди ABI, Roche ва Bio-Rad мебошад.Агар шумо таваҷҷӯҳ дошта бошед, шумо метавонед онро тафтиш кунед.Ин усул дар айни замон техникаи аз ҳама пухта ва васеъ истифодашавандаи ниммикдори ПЗР мебошад.
Мошини тавсияшудаи qPCR: https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
Усули рангкунии флуоресцентӣ (SYBR Green I):SYBR Green I рангест, ки аз ҳама маъмулан истифодашавандаи ДНК-и ҳатмӣ барои PCR-и миқдорӣ мебошад, ки ба таври мушаххас ба ДНК-и дуқабата пайваст мешавад.Дар ҳолати озод, SYBR Green флуорессенси заиф мебарорад, аммо вақте ки ба ДНК-и дуқабата пайваст мешавад, флуорессенсияи он 1000 маротиба меафзояд.Аз ин рӯ, сигнали умумии флуоресцентие, ки тавассути реаксия бароварда мешавад, ба миқдори ДНК-и дуқабата мутаносиб аст ва бо афзоиши ҳосили пурқувватшуда зиёд мешавад.Азбаски ранг ба ДНК-и дуқабата ғайримахсус мепайвандад, метавонад натиҷаҳои мусбати бардурӯғ тавлид шаванд.
Маҳсулоти марбут: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
Усули зондҳои флуоресцентӣ (технологияи Taqman): Дар давомиАмплификацияи PCR, як зондҳои флюоресцентии мушаххас дар як вақт ҳамчун як ҷуфт праймерҳо илова карда мешаванд.Зонд як олигонуклеотиди хаттӣ буда, дар ҳарду канори он гурӯҳи мухбирони флуоресцентӣ ва гурӯҳи хомӯшкунандаи флуоресцентӣ мутаносибан нишонгузорӣ шудааст.Вақте ки зонд солим аст, сигнали флуоресценти аз ҷониби гурӯҳи хабарнигор баровардашуда аз ҷониби гурӯҳи хомӯшкунанда ҷаббида мешавад ва ошкоркунӣ Сигнали флуоресцентӣ вуҷуд надорад;ҳангоми тақвияти PCR (дар марҳилаи васеъшавӣ), фаъолияти 5'-3' Дисери ферменти Taq зондро ҳазм мекунад ва таназзул мекунад, то гурӯҳи флуоресценти гузоришдиҳанда ва гурӯҳи флуоресценти хомӯшкунанда ҷудо карда шаванд, то системаи мониторинги флуоресцентӣ сигнали флуоресцентӣ қабул карда шавад, яъне ҳар дафъае, ки занҷири ДНК як зукоми пурраи синтезро ташкил медиҳад, ҷамъшавии сигналҳои флуоресцентӣ ва ташаккули маҳсулоти PCR.Усули санҷиши тақман усули маъмултарин дар ташхиси клиникӣ мебошад.
Маҳсулоти марбут: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
Афзалиятҳои qPCR
1.Усули пухта ва таҷҳизоти ёрирасон ва реактивҳо пурра мебошанд
2.Арзиши миёнаи реактивхо
3.осон ба истифода
4.Ҳассосият ва хосияти баланди ошкоркунӣ
Камбудиҳои qPCR
Мутацияи гени мақсаднок ба дарёфти гумшуда оварда мерасонад.
Натиҷаи ошкор кардани қолаби консентратсияи пастро муайян кардан мумкин нест.
Ҳангоми истифодаи хатти стандартӣ барои муайянкунии миқдорӣ хатои калон вуҷуд дорад.
3. Технологияи рақамии PCR (PCR рақамӣ, dPCR).
PCR рақамӣ як усули муайян кардани миқдори мутлақи молекулаҳои кислотаи нуклеинӣ мебошад.Дар муқоиса бо qPCR, PCR рақамӣ метавонад мустақиман шумораи молекулаҳои ДНК/РНК-ро хонад, ки миқдори мутлақи молекулаҳои кислотаи нуклеинӣ дар намунаи ибтидоӣ мебошад.Дар соли 1999 Берт Фогелштейн ва Кеннет В. Кин-злер консепсияи dPCR-ро ба таври расмӣ пешниҳод карданд.
Дар соли 2006, Fluidigm аввалин шуда асбоби тиҷоратии dPCR-ро ба чип асос ёфтааст.Дар соли 2009, Life Technologies системаҳои OpenArray ва QuantStudio 12K Flex dPCR-ро ба кор андохтанд.Дар соли 2013, Life Technologies системаи QuantStudio 3DdPCR-ро ба кор бурд, ки технологияи микрофлюидикии наномикёси зичии баландро барои ба таври баробар тақсим кардани намунаҳо ба 20,000 ҳуҷайраҳои инфиродӣ истифода мебарад.дар реаксия хуб.
Дар соли 2011, Bio-Rad асбоби QX100 dPCR-ро ба қатра асос ёфтааст, ки технологияи об дар равғанро барои баробар тақсим кардани намуна ба 20,000 қатра-об-дар нафт истифода мебарад ва барои таҳлили қатраҳо аз анализатори қатра истифода мебарад.Дар соли 2012, RainDance асбоби RainDrop dPCR-ро ба кор андохтааст, ки бо гази фишори баланд идора мешавад, то ҳар як системаи реаксияи стандартиро ба эмульсияи реаксия, ки дорои 1 миллион то 10 миллион микро-қатраҳои сатҳи пиколитр дорад, тақсим кунад.
То ба ҳол, PCR рақамӣ ду фраксияи асосӣ, навъи чип ва навъи қатра ташкил кардааст.Новобаста аз он, ки кадом намуди PCR рақамӣ, принсипҳои асосии он маҳдуд кардани ҳалкунӣ, PCR нуқтаи ниҳоӣ ва тақсимоти Пуассон мебошанд.Системаи стандартии реаксияи ПТР, ки дорои қолибҳои кислотаи нуклеинӣ мебошад, ба даҳҳо ҳазор реаксияҳои ПТР баробар тақсим карда мешавад, ки онҳо ба микросхемаҳо ё микродроплетҳо тақсим карда мешаванд, то ки ҳар як реаксия то ҳадди имкон молекулаи қолабӣ дошта бошад ва реаксияи якмолекулаи якмолекулаи ПТР анҷом дода мешавад.Бо хондани флуорессенсия Мавҷудият ё набудани сигнал ҳисоб карда мешавад ва миқдори мутлақ пас аз калибровкаи тақсимоти омории Пуассон анҷом дода мешавад.
Инҳоянд хусусиятҳои якчанд платформаҳои рақамии PCR, ки ман истифода кардам:
1. Bio-Rad QX200 қатраи рақамии PCR Bio-RadQX200 як платформаи хеле классикии рақамии PCR аст, раванди асосии муайянкунӣ: 20 000 намуна аз ҷониби генератори қатраҳо тавлид карда мешавад. Микро қатраҳои об дар равған дар як мошини оддии PCR пурзӯр карда мешаванд ва дар ниҳоят сигнали флуорессенси ҳар як қатрача аз ҷониби хонандаи микро қатраҳо хонда мешавад.Амалиёт мураккабтар аст ва хавфи ифлосшавӣ миёна аст.
Xinyi TD1 микро қатрачаҳои PCR рақамӣXinyi TD1 як платформаи рақамии PCR-и ватанӣ мебошад, ки раванди асосии муайянкунӣ: тавлиди 30,000-50,000 қатраҳои об дар равған тавассути генератори қатра, дар асбоби маъмулии PCR пурзӯр кунед ва дар ниҳоят гузаронед Хонандаи қатра сигнали флуоресцентии ҳар як қатраро мехонад.Ҳам тавлиди қатраҳо ва ҳам хондан дар ин платформа дар чипи махсус бо хатари ками олудашавӣ анҷом дода мешавад.
STILLA Naica чипи микро қатраҳои PCR рақамӣSTILLA Naica як платформаи нисбатан нави рақамии PCR мебошад.Раванди асосии муайянкунӣ ин аст: ҳалли реаксияро ба чип илова кунед, чипро ба системаи тавлид ва тақвияти микро-қатраҳо гузоред ва 30,000 микро-қатраҳоро тавлид кунед.Паҳн дар чип, ва тақвияти PCR дар чип анҷом дода мешавад.Сипас чипи пурқувватшуда ба системаи таҳлили хониши микро қатраҳо интиқол дода мешавад ва сигнали флуоресцентӣ тавассути гирифтани суратҳо хонда мешавад.Азбаски тамоми раванд дар як чипи пӯшида сурат мегирад, хатари олудашавӣ кам аст.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D чипи PCR рақамӣ
ThermoFisher QuantStudio 3D боз як платформаи рақамии PCR дар асоси чипи классикӣ мебошад.Раванди асосии муайянкунии он ин аст: маҳлули реаксияро ба паҳнкунанда илова кунед ва маҳлули реаксияро дар чип бо 20,000 микроэлементҳо тавассути паҳнкунанда ба таври баробар паҳн кунед., чипро ба мошини PCR барои пурзӯр кардан гузоред ва дар ниҳоят чипро ба хонанда гузоред ва барои хондани сигнали флуоресцентӣ акс гиред.Амалиёт нисбатан мураккаб буда, тамоми процесс дар чипи пушида гузаронда мешавад ва хавфи олудашавй кам аст.
5. JN MEDSYS Clarity чипи рақамӣ PCR
JN MEDSYS Clarity як платформаи рақамии PCR-навъи нисбатан нав аст.Раванди асосии муайянкунии он ин аст: маҳлули реаксияро ба апликатор илова кунед ва маҳлули реаксияро дар 10 000 найчаи ПТР ба воситаи аппликатор дар найчаи ПТР собит ба таври баробар паҳн кунед.Дар чипи микропороз маҳлули реаксия тавассути амали капиллярӣ ба чип ворид мешавад ва найчаи PCR бо чип барои пурзӯр кардан дар мошини ПТР ҷойгир карда мешавад ва дар ниҳоят чип ба хонанда гузошта мешавад, то сигнали флуоресцентиро бо гирифтани акс хонед.Амалиёт мураккабтар аст.Хавфи ифлосшавӣ кам аст.
Параметрҳои ҳар як платформаи рақамии PCR ба таври зерин ҷамъбаст карда мешаванд:
Нишондиҳандаҳои арзёбии платформаи рақамии PCR инҳоянд: шумораи воҳидҳои тақсимшуда, шумораи каналҳои флуоресцентӣ, мураккабии амалиёт ва хатари олудашавӣ.Аммо чизи аз ҳама муҳим ин дурустии ошкор аст.Як роҳи баҳодиҳии платформаҳои рақамии ПТР ин истифодаи платформаҳои рақамии PCR барои тафтиши ҳамдигар ва роҳи дигар ин истифодаи моддаҳои стандартӣ бо арзишҳои дақиқ мебошад.
Афзалиятҳои dPCR
1.Ба даст овардани миқдори мутлақ
2.Ҳассосият ва хосияти баландтар
3.Намунаҳои нусхабардории камро муайян карда метавонад
Камбудиҳои dPCR1. Таҷҳизот ва реактивҳои гаронбаҳо 2. Фаъолияти мураккаб ва вақти тӯлонии муайянкунӣ 3. Диапазони танги ошкор
Дар айни замон, се насли технологияи PCR афзалиятҳо ва нуқсонҳои худро доранд ва ҳар кадоми онҳо соҳаҳои татбиқи худро доранд ва муносибате нест, ки як насл наслро иваз кунад.Пешрафти пайвастаи технология ба технологияи PCR қувваи нав ворид намуда, ба он имкон медиҳад, ки як самти татбиқро паси дигар кушояд ва муайянкунии кислотаи нуклеинро қулай ва дақиқтар кунад.
Сарчашма: Доктор Юан шуморо барои санҷиш мебарад
Маҳсулоти тавсияшаванда:
Вақти фиристодан: Ноябр-18-2022
