Дастури таҳлили мушкилот

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Ҳосили паст ё набудани ДНК

Одатан омилҳои зиёде мавҷуданд, ки ба ҳосили ДНК-и геномӣ таъсир мерасонанд, аз ҷумла манбаи намуна, синну соли намуна, шароити нигоҳдории намуна ва амалиёт.

Ҳангоми истихроҷ ДНК-и геномӣ ба даст оварда нашуд

1. Намунаҳои матоъ нодуруст нигоҳ дошта мешаванд ё барои аз ҳад зиёд нигоҳ дошта мешаванд, ки дар натиҷа ДНК-и геномӣ вайрон мешавад.

Тавсия: Намунаҳои бофтаҳоро дар нитрогени моеъ ё -20 нигоҳ доред°C;кӯшиш кунед, ки намунаҳои нав ҷамъовардашударо барои истихроҷи геномии ДНК истифода баред.

2. Миқдори хеле ками намуна метавонад боиси истихроҷи ДНК-и геномии мувофиқ гардад.

Пешниҳод: Барои намунаҳои матоъе, ки муддати тӯлонӣ нигоҳ дошта шудаанд ё таназзули шадиди геномии ДНК доранд, миқдори намунаҳои бофтаро метавон ба таври мувофиқ зиёд кард, то ДНК-и назарраси геномӣ гирифта шавад.Миқдори намунаро мувофиқи ниёзҳои ДНК муайян кардан мумкин аст, аммо намунаи тару тоза набояд аз 100 мг ва намунаи хушк набояд аз 30 мг зиёд бошад.

3. Намуна бо нитрогени моеъ хок карда намешавад ё пас аз нитрогени моеъ хеле дароз гузошта мешавад.

Пешниҳод: Ҳангоми истихроҷи ДНК, намуна бояд бо нитрогени моеъ пурра хок карда шавад, то девори ҳуҷайраро вайрон кунад;пас аз дастос, лутфан хокаи намунаро ба PL1, ки дар 65 пешакӣ гарм карда шудааст, интиқол диҳед°C ҳарчи зудтар (вақте ки хокаи замин гудохта мешавад, ДНК-и геномӣ зуд вайрон мешавад).

4. Нигоҳдории нодурусти Foregene Protease боиси коҳиш ё ғайрифаъол шудани фаъолият мегардад.

Тавсия: Шароити нигоҳдории Foregene Protease-ро тасдиқ кунед ё онро бо протеазаи нави Foregene Protease барои гидролизи ферментативӣ иваз кунед.

5. Маҷмӯа нодуруст нигоҳ дошта мешавад ё барои хеле дароз нигоҳ дошта мешавад, ки боиси аз кор баромадани баъзе ҷузъҳои маҷмӯа мегардад.

Тавсия: Маҷмӯаи нави истихроҷи геномии ДНК-и растанӣ барои амалиёти марбутаро харед.

6. Истифодаи нодурусти маҷмӯа.

Пешниҳод: Маҷмӯаи изолятсияи ДНК-и растанӣ, ки барои намунаҳо барои истихроҷ ва тоза кардани ДНК геномии растанӣ бахшида шудааст, харед.

7. Буферии БҶ бе илова кардани абеоб этанол.

Тавсия: Боварӣ ҳосил кунед, ки ҳаҷми дурусти этаноли мутлақро ба Buffer WB илова кунед.

8. Элюент ба мембранаи кремний дуруст пошида нашудааст.

Пешниҳод: Элюенти қаблан гармшуда дар 65 илова кунед℃қатра ба мобайни мембранаи силикагель гузошта, онро дар ҳарорати хонагӣ барои 5 дақиқа гузоред, то ки самаранокии элюсия баланд шавад.

Истихроҷ барои ба даст овардани ДНК-и геномии камҳосил

1. Намунаро нодуруст нигоҳ доштан ё барои аз ҳад зиёд нигоҳ доштан, ба таназзули ДНК-и геномӣ оварда мерасонад.

Тавсия: Намунаҳои бофтаҳоро дар -20 нигоҳ доред℃;кӯшиш кунед, ки намунаҳои бофтаи нав ҷамъовардашударо барои истихроҷи геномии ДНК истифода баред.

2. Агар миқдори намунаҳои бофта хеле кам бошад, ДНК-и геномии истихроҷшуда камтар хоҳад буд.

Пешниҳод: Баъзе намунаҳои растанӣ аз об бой мебошанд, аз қабили растаниҳои обӣ, аз қабили алгҳо ва ғайра, миқдорро ба таври мувофиқ зиёд кардан мумкин аст ё обро каме пеш аз амалиёт хушк кардан мумкин аст.

3. Намунаҳо бо нитрогени моеъ пурра хок карда нашудаанд ё пас аз суфтакунӣ дар ҳарорати хонагӣ барои муддати тӯлонӣ монданд.

Пешниҳод: Дастос кардани нитрогени моеъ бояд кофӣ бошад ва девори ҳуҷайраи намунавӣ то ҳадди имкон шикаста шавад;фавран пас аз дастос, хокаи намуна бояд ба 65 интиқол дода шавад℃Буфери PL1-и пешакӣ гармшуда барои қадами оянда.

4. Истифодаи маҷмӯаи дуруст.

Тавсия: Барои истихроҷ ва тоза кардани ДНК-и геномии растанӣ маҷмӯаи ҷудокунии ДНК-и растаниҳоро истифода баред.

5. Нигоҳдории нодурусти Foregene Protease боиси коҳиш ё ғайрифаъол шудани фаъолият мегардад.

Тавсия: Шароити нигоҳдории Foregene Protease-ро тасдиқ кунед ё онро бо протеазаи нави Foregene Protease барои гидролизи ферментативӣ иваз кунед.

6. Масъалаи элюент

Тавсия: Лутфан буфери EB-ро барои элюсия истифода баред;агар истифодаи ddH₂Эй ё дигар элюентҳо, боварӣ ҳосил кунед, ки рН-и элюент байни 7,0-8,5 аст.

7. Элюент дуруст пошида нашудааст

Пешниҳод: Лутфан, қатраи элюциониро ба мобайни мембранаи кремний илова кунед ва онро дар ҳарорати хонагӣ барои 5 дақиқа гузоред, то ки самаранокии элюсия баланд шавад.

8. Ҳаҷми элюент хеле хурд аст

Пешниҳод: Лутфан элюентро барои элюсияи геномии ДНК мувофиқи дастурҳо истифода баред, на камтар аз 100мкл.

ДНК-и геномии истихроҷшуда бо тозагии паст

Тозагии пасти ДНК-и геномӣ ба нокомӣ ё таъсири сусти таҷрибаҳои поёноб оварда мерасонад, масалан: ферментро буридан мумкин нест ва порчаи гени мавриди ҳадаф тавассути PCR гирифта намешавад.

1. Ифлосшавии сафедањои гуногун, олудашавии РНК.

Таҳлил: буфери PW барои шустани сутун истифода нашудааст;Буфери PW барои шустани сутун бо суръати дурусти центрифугакунӣ истифода нашуд.

Таклиф: кушиш кунед, ки хангоми аз колонна гузаштани сутун дар лахта боришот набошад;итминон ҳосил кунед, ки сутуни тозакуниро бо Buffer PW мувофиқи дастурҳо бишӯед ва ин қадамро партофтан мумкин нест.

2. ифлосшавии ионҳои наҷосат.

Таҳлил: Сутуни шустушӯи Buffer WB хориҷ карда шуд ё танҳо як маротиба шуста шуд, ки дар натиҷа олудашавии боқимондаи ионӣ ба вуҷуд омад.

Тавсия: Ҳатман ду маротиба бо Buffer WB мувофиқи дастурҳо шустани ионҳои боқимондаро то ҳадди имкон тоза кунед.

3. Ифлосшавии RNase.

Таҳлил: RNase экзогенӣ ба буфер илова карда мешавад;амалиёти нодурусти шустан дар Buffer PW боиси боқимондаи RNase мегардад ва ба амалиёти таҷрибавии РНК дар поёноб, ба монанди транскрипсияи in vitro таъсир мерасонад.

Пешниҳод: Маҷмӯаҳои истихроҷи кислотаи нуклеинии силсилаи Foregene метавонанд РНК-ро бидуни RNase иловагӣ хориҷ кунанд ва ба ҳама реагентҳо дар маҷмӯаи изолятсияи ДНК-и растанӣ ба RNase ниёз надоранд;итминон ҳосил кунед, ки сутуни тозакуниро бо Buffer PW мувофиқи дастурҳо бишӯед ва ин қадамро сарфи назар кардан мумкин нест.

4. Боқимондаҳои этанол.

Таҳлил: Пас аз шустани сутуни тозакунӣ бо Buffer WB, ҳеҷ гуна центрифугаи найчаи холӣ анҷом дода нашуд.

Тавсия: Дастурҳоро оид ба центрифугаи дурусти найчаи холӣ риоя кунед.

Дастури дастурӣ:

Дастури дастурии маҷмӯаи изолятсияи ДНК-и растанӣ