Муаллифон: Ван Сяоян, Чжао Эрю

Шӯъба: Беморхонаи Ҷяозжоу, Беморхонаи Dongfang вобаста ба Донишгоҳи Тонгҷӣ

Дар айни замон, навъи асосии намуна барои муайян кардани кислотаи нуклеинии патогении роҳи нафас тампончаи гулӯ мебошад.Намудҳои зиёди маҳлулҳои нигоҳдории намунаҳо мавҷуданд, ки ҳамаи онҳо барои интиқол ва нигоҳдорӣ бояд яхдон ё ях карда шаванд;Ҳангоми ҷамъоварӣ ва интиқол назорат кардани тамоми раванди ҳарорати паст душвор аст ва пеш аз санҷиши намуна таъмин кардани назорати сифат душвор аст.^[1-2].

RNase (RNase) як эндонуклеазаест, ки РНК-ро гидролиз мекунад ва асосан пайвандҳои фосфодиэфириро байни нуклеотидҳо буридааст.Молекулаи RNase хеле устувор аст, дар сохтор пайвандҳои дисульфидӣ мавҷуданд ва фаъолияти он мавҷудияти катионҳои дувалентиро талаб намекунад, бинобар ин RNase ба осонӣ денатуратсия намешавад ва ҳатто пас аз ҳарорати баланд ё истифодаи денатурантҳо ренатуратсия кардан осон аст.РНазҳо ба эндогенӣ ва экзогенӣ тақсим мешаванд.РНазҳои эндогенӣ метавонанд дар як вақт ҳангоми шикастани ҳуҷайраҳо озод карда шаванд.Аз ин рӯ, бартараф кардани нақши RNases эндогенӣ як қадами хеле муҳим дар раванди истихроҷи РНК мебошад.РНазҳои экзогенӣ ба таври васеъ паҳн шудаанд.RNases дар ҳаво, пӯсти инсон, мӯй ва гилро мавҷуд аст, ки сабабҳои муҳими таназзули осони РНК мебошанд.^[3].

Дархости маълумот

CANS-CL02-A009 "Татбиқи дастурҳои аккредитатсияи сифати лабораторияи тиббӣ ва салоҳият дар соҳаи ташхиси молекулавӣ" дар талаботи техникӣ пешниҳод мекунад, ки стандартҳои мувофиқи сифати об мувофиқи ариза таҳия карда шаванд;Контейнерҳои якдафъаинаи ҳаво:

RNase/Тасниф

(1) RNase A

Рибонуклеаза А (RNase A), ки аз гадуди гов ба даст омадааст, як эндорибонуклеаза аст, ки метавонад ба таври махсус метавонад ба охири 3' боқимондаҳои пиримидин дар РНК ҳамла кунад, ситозин ё урацилро бурида, ки аз нуклеотидҳои ҳамсоя ба вуҷуд омадаанд.Пайванди фосфодиэфир, маҳсули ниҳоии реаксия як нуклеотиди 3' пиримидин ва олигонуклеотид бо нуклеотиди 3' пиримидин дар охири он мебошад.

(2) RNase T1

Рибонуклеаза T1 (RNase T1) аз Aspergillus orjzae гирифта шудааст, он махсусан дар фосфати 3'-терминали гуанин амал мекунад ва макони тақсимшавӣ дар байни 3' фосфати гуанин ва 5' гидроксили нуклеотидҳои ҳамсоя ҷойгир аст.Маҳсулоти ниҳоии реаксия 3′кислотаи гуанилӣ ва порчаҳои олигонуклеотид бо кислотаи 3′гуаниликӣ дар охири он мебошанд.

(3) RNase H

Рибонуклеаза H (RNase H) бори аввал аз бофтаи тимуси гӯсола кашф шуда буд ва гени рамзгузории он ба coli coli клон карда шудааст.Он метавонад махсусан ДНК-ро вайрон кунад: риштаҳои РНК дар дуплексҳои гибридии РНК, ки дар натиҷа олигонуклеотидҳо ва мононуклеотидҳо бо нӯгҳои 3′-OH ва 5′-монофосфат ба вуҷуд меоянд, он наметавонад ДНК ё РНК-и якқатор ё дуқабатаро таназзул кунад.

RNase

Функсия ва истифода

Рибонуклеаза метавонад таназзули кислотаи рибонуклеинро (РНК) катализ кунад ва ба таври сунъӣ синтез карда шавад.Малҳами шифобахш ба таври маҳаллӣ барои табобати ҷароҳат ва дарди буғумҳо истифода мешавад.Тибқи гузоришҳо, рибонуклеаза метавонад мубодилаи ҳуҷайраҳои мизбонро тағир диҳад, синтези вирусро боздорад, паҳншавии вируси зукомро дар vitro боздорад ва ташаккули ваксина ва вируси герпесро дар ҷанинҳои мурғ боздорад.Истифодаи клиникии рибонуклеаза ҳаррӯза ба дохили мушакҳо 180 мг, ки барои табобати энцефалитҳои эпидемӣ муфид аст, рибонуклеаза метавонад таназзули кислотаи рибонуклеинро (РНК) катализ кунад ва ҳоло метавонад ба таври сунъӣ синтез карда шавад.Малҳами шифобахш ба таври маҳаллӣ барои табобати ҷароҳат ва дарди буғумҳо истифода мешавад.Тибқи гузоришҳо, рибонуклеаза метавонад мубодилаи ҳуҷайраҳои мизбонро тағир диҳад, синтези вирусро боздорад, паҳншавии вируси зукомро дар vitro боздорад ва ташаккули ваксина ва вируси герпесро дар ҷанинҳои мурғ боздорад.Истифодаи клиникии рибонуклеаза дар як рӯз ба дохили мушак 180 мг барои табобати энцефалит эпидемӣ муфид аст.

RNase

Таърифи ингибитор

Таърифи воҳиди ингибитори RNase: Миқдори ферменте, ки барои монеъ кардани 50% фаъолияти 5ng RNase A зарур аст, як воҳид аст.

Чӣ тавр ингибиторҳои RNase кор мекунанд

Гуанидин изотиоцианат:

Изотиоцианати гуанидин як пайвастагии органикӣ бо формулаи молекулавии C2H6N4S мебошад.Асосан дар тибби биологӣ, реагентҳои кимиёвӣ ва ғайра истифода бурда мешавад. Guanidine isothiocyanate агенти lysing сафеда аст, ва он аст, аксар вақт ҳамчун ҷузъи асосии маҳлули lysis дар реагентҳои ташхиси молекулавӣ истифода бурда мешавад.Он метавонад матоъро лиз кунад, сохтори ҳуҷайраҳоро вайрон кунад ва кислотаи нуклеинро аз нуклеопротеин ҷудо кунад ва денатуратсияи қавӣ ба RNase дорад.Он дар айни замон самараноктарин ингибитори RNase мебошад.

TRIzol як реагенти умумии истихроҷи РНК мебошад, ки метавонад бевосита РНК-и умумиро аз ҳуҷайраҳо ё бофтаҳо истихроҷ кунад.Он дорои моддаҳое ба монанди фенол ва гуанидин изотиоцианат мебошад, ки метавонанд ҳуҷайраҳоро зуд вайрон кунанд ва нуклеазҳои аз ҳуҷайраҳо баровардашударо боздоранд.

(Аммо, изотиоцианати гуанидин барои саломатии муҳаққиқони лаборатория хатарнок аст.)

RNasin:

Кислотаи гликопротеини аз ҷигари каламуш ё бластодерми одам гирифташуда.Rnasin як ингибитори рақобатпазири RNase мебошад, ки метавонад ба RNase гуногун пайваст шавад, то онҳоро ғайрифаъол кунад.

(Тафсилоти бештар: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hҳарорати баланд:

Ҳарорати баланд инчунин воситаи маъмули денатуратсияи сафеда мебошад.

Диэтилпирокарбонат (DEPC):

DEPC як ингибитори қавӣ, вале нопурраи RNase аст, ки метавонад фаъолияти RNase-ро тавассути якҷояшавӣ бо ҳалқаи аминокислотаи имидазоли гурӯҳи фаъоли RNase барои денатурат сафедаҳо боздорад.

Комплекси ванадил рибонуклеозид:

Маҷмӯае, ки аз ионҳои оксиди ванадий ва нуклеозидҳо ба вуҷуд омадааст, ки бо RNase дар шакли моддаҳои гузаранда пайваст мешавад, ки метавонад фаъолияти RNase-ро қариб пурра боздорад.

дигар:

СДС, мочевина, замини диатомӣ ва ғайра низ ба RNase таъсири муайяни ингибиторӣ доранд.

Баррасиҳои коршиносон

Сартехник Ли Южие

Директори шӯъбаи лабораторияи беморхонаи Ҷяозжоу, беморхонаи Донгфан, ки ба Донишгоҳи Тонгҷӣ вобаста аст

Барои пешгирии биодеградатсияи RNase экзогенӣ, ҳангоми истихроҷи РНК бояд ниқобҳо, дастпӯшҳо ва кулоҳҳо пӯшанд ва зуд-зуд иваз карда шаванд.Ҳама зарфҳои шишагин бояд дар танӯр хушккунӣ дар ҳарорати 200 ° C зиёда аз 2 соат пухта шаванд.Маводҳое, ки барои нонпазӣ истифода мешаванд, ба монанди пластик, бояд бо оби DEPC коркард карда шаванд ва сипас бо оби тозашуда шуста шаванд.Реагентҳо ё дастгоҳҳое, ки барои истихроҷ, нигоҳдорӣ ва муайянкунии РНК истифода мешаванд, бояд ба РНК бахшида шаванд ва минтақаи мустақили амалиёти РНК таъсис дода шавад.

истинодҳо:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Бактерияҳо ва вирусҳо дар назофаринкс фавран пеш аз фарорасии сироятҳои шадиди роҳҳои нафас дар кӯдакони бумии Австралия [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Филиали назорати сироятии беморхонаи Ассотсиатсияи тибби пешгирикунандаи Чин.Дастур оид ба ҷамъоварӣ ва санҷиши намунаҳои микробҳои клиникӣ [J].Маҷаллаи Чин оид ба сирояти беморхона, 2018 (20): 3192-3200.

[3] "Санҷиши клиникии даҳ ҳазор чаро ҳаҷми санҷиши биологияи молекулавӣ"