Ман боварӣ дорам, ки ҳама ҳамеша ҳангоми анҷом додани реаксияҳои PCR ба ин ё он мушкилот дучор мешаванд, аммо аксарияти онҳоро метавон ба ду мушкилоти асосӣ тақсим кард:

Амплификацияи хеле ками қолаби ген (амплификация);
Аз ҳад зиёд тақвият додани генҳои ғайримақсаднок.
Истифодаи иловаҳо яке аз стратегияҳои маъмули ҳалли ин мушкилот мебошад.Одатан нақши иловагиҳо ду ҷанба дорад:
сохтори дуюмдараҷагенҳо (сохти дуюмдараҷа);
Кам кардани пешбурди ғайримуқаррарӣ.
Имрӯз, муҳаррир ба шумо ба таври мухтасар бо иловаҳои маъмул дар реаксияҳои PCR ва вазифаҳои онҳо шинос хоҳад шуд.
Иловаҳо, ки сохтори дуюмдараҷаро коҳиш медиҳанд
сульфоксид(DMSO)
намунаҳои генбо мазмуни баланди GC.Аммо, DMSO инчунин фаъолияти полимеразаи Taq-ро хеле коҳиш медиҳад.Аз ин рӯ, ҳама бояд дастрасии шаблон ва фаъолияти полимеразро мувозинат кунанд.Муҳаррир пешниҳод мекунад, ки шумо метавонед консентратсияи гуногуни DSMO-ро санҷед, масалан, аз 2% то 10%, то консентратсияи ба таҷрибаи шумо мувофиқро пайдо кунед.
Воситаҳои шустушӯии ғайриионикӣ
Модҳои шустушӯии ғайриионикӣ, ба монанди 0,1-1% Triton X-100, Tween 20 ё NP-40, одатан сохтори дуюмдараҷаи ДНК-ро коҳиш медиҳанд.Гарчанде ки ин метавонад тақвияти гени шаблонро афзоиш диҳад, он инчунин боиси мушкилоти амплификацияи ғайримуқаррарӣ мегардад.Ҳамин тавр, ин иловаҳо барои реаксияҳои пасти PCR бе партовҳо хуб кор мекунанд, аммо барои реаксияҳои нисбатан нопоки ҶМН чандон хуб нестанд.Бартарии дигари шустушӯйҳои ғайриионикӣ кам кардани ифлосшавии SDS мебошад.Одатан, ҳангоми истихроҷи ДНК, SDS ба марҳилаи PCR оварда мешавад, ки фаъолияти полимеразро хеле бозмедорад.Аз ин рӯ, илова кардани 0,5% Tween-20 ё Tween-40 ба реаксия метавонад таъсири манфии SDS-ро безарар созад.
Бетаин_
Бетаин метавонад тақвияти ДНК-ро тавассути коҳиш додани ташаккули сохтори дуюмдараҷа беҳтар созад ва дар маҷмӯъ як “асрор” ба маҷмӯаҳои тиҷоратии PCR аст.Агар шумо хоҳед, ки бетаинро истифода баред, шумо бояд бетаин ё бетаин моно-гидрат (бетаин ё бетаин моно-гидрат) гузоред, аммо на гидрохлориди бетаин (бетаин HCl), ба консентратсияи ниҳоии 1-1,7М мувофиқ кунед.Бетаин инчунин метавонад ба беҳтар кардани мушаххасот кӯмак кунад, зеро он вобастагии таркиби ҷуфти асосиро аз обшавии ДНК/денатуратсияи ДНК бартараф мекунад.
Иловаҳо барои кам кардани пешравии ғайримуқаррарӣ
Формамид
Формамид як иловаи маъмули органикии PCR мебошад.Он метавонад бо чуқури асосӣ ва чуқури хурд дар ДНК муттаҳид шуда, устувории спирали дукаратаи ДНК-ро коҳиш диҳад ва ҳарорати обшавии ДНК-ро паст кунад.Консентратсияи формамиде, ки дар таҷрибаҳои PCR истифода мешавад, одатан 1%-5% аст.
тетраметилхлориди аммоний( TMAC)
Хлориди тетраметиламмоний метавонад хосияти гибридизатсия (хусусияти гибридизатсия) ва ҳарорати обшавии ДНК-ро баланд бардорад.Ҳамин тариқ, TMAC метавонад пешбарии ғайримуқаррариро хориҷ кунад ва пайвасти нодурусти ДНК ва РНК-ро коҳиш диҳад.Агар шумо истифода баредпраймерҳои вайроншудадар реаксияи PCR, фаромӯш накунед, ки TMAC илова кунед, ки одатан дар консентратсияи 15-100mM истифода мешавад.
Дигар иловаҳои умумӣ
Илова ба ду категорияи иловаҳои дар боло зикршуда, дар реаксияҳои ПТР бисёр иловаҳои умумӣ мавҷуданд, гарчанде ки онҳо вазифаҳои гуногун доранд, онҳо низ хеле муҳиманд.
Иони магний
Иони магний кофактор (кофактор)-и ивазнашавандаи полимераз аст, яъне бе иони магний полимераз ғайрифаъол аст.Аммо, ионҳои аз ҳад зиёди магний низ метавонанд ба самаранокии полимераз таъсир расонанд.Консентратсияи ионҳои магний дар ҳар як реаксияи PCR фарқ мекунад.Агентҳои хелатӣ (ба монанди EDTA ё цитрат), консентратсияи dNTPs ва сафедаҳо ҳама ба консентратсияи ионҳои магний таъсир мерасонанд.Ҳамин тавр, агар шумо бо таҷрибаи PCR-и худ мушкилот дошта бошед, шумо метавонед кӯшиш кунед, ки консентратсияи ионҳои гуногуни магнийро, масалан, аз 1,0 то 4,0 мм, бо фосилаи 0,5-1 мм, тағир диҳед.
Қобили зикр аст, ки давраҳои сершумори яхкунӣ-обшавӣ метавонад ба стратификацияи консентратсияи маҳлули хлориди магний оварда расонад.Аз ин рӯ, шумо бояд пеш аз ҳар истифода онро комилан ҳал кунед ва пеш аз истифода онро хуб омехта кунед.
Альбумини хунобаи гов(Албумини гов, BSA)
Дар таҷрибаҳои химияи молекулавӣ альбумини хунобаи гов як иловаи хеле маъмул аст, махсусан дар ҳозимаи ферментҳои маҳдудкунанда ва таҷрибаҳои PCR.Дар реаксияҳои PCR, BSA дар коҳиш додани ифлоскунандаҳо ба монанди пайвастагиҳои фенолӣ муфид аст.Ва инчунин гуфта мешавад, ки он метавонад часпидани реактивҳоро ба девори найчаи озмоишӣ коҳиш диҳад.Дар реаксияи PCR, одатан консентратсияи BSA иловашуда метавонад ба 0,8 мг / мл расад.
 
Маҳсулоти марбут:
Қаҳрамони PCR(бо ранг)
Қаҳрамони PCR