Хусусияти барҷастаи реаксияи PCR қобилияти васеъкунии он ва ҳассосияти бениҳоят баланд аст.Бо мақсади баланд бардоштани самаранокии PCR ва самаранокии муайянкунӣ, мо ӯҳдадор ҳастем, ки қобилияти тақвияти PCR ва ҳассосияти ошкорро беҳтар кунем, аммо дарди сар дар ҷараёни таҷриба аст.Аксар вақт мусбатҳои бардурӯғ рух медиҳанд ва миқдори хеле ками ифлосшавии намуна ё ифлосшавии маҳсулоти PCR метавонад дар озмоиш мусбатҳои бардурӯғро ба вуҷуд орад.
Панҷ намуди ифлосшавии маҳсулоти PCR
Сабабҳои зиёде барои ифлосшавии PCR мавҷуданд, ки онҳоро тақрибан ба категорияҳои зерин тақсим кардан мумкин аст:
Ифлосшавии намуна асосан аз ифлосшавии контейнер барои ҷамъоварии намуна ба вуҷуд меояд ё ҳангоми гузоштани намуна, аз сабаби мӯҳри фуҷур аз контейнер берун мерезад ё намуна ба беруни контейнер часпида мешавад, ки боиси ифлосшавии байнисоҳавӣ мегардад;Ифлосшавӣ боиси ифлосшавии байни намунаҳо мегардад;баъзе намунаҳои микробҳо, махсусан вирусҳо, метавонанд бо аэрозолҳо паҳн шаванд ё аэрозолҳо ба вуҷуд оранд, ки дар натиҷа ифлосшавии мутақобила мешаванд.
Сабаби асосї дар он аст, ки њангоми тайёр кардани реагентњои ПТР таппончаи намуна, зарф, оби дукаратаи дистиллшуда ва мањлулњои дигар бо ќолаби кислотаи нуклеини ПТР олуда мешаванд.
Дар лабораторияҳои биологияи молекулавӣ ва баъзе лабораторияҳое, ки плазмидҳои клоншударо ҳамчун назорати мусбӣ истифода мебаранд, мушкилоти ифлосшавии плазмидҳои клоншуда низ маъмул аст.Зеро мазмуни плазми клонкунӣ дар ҳаҷми воҳид хеле зиёд аст ва дар раванди тозакунӣ асбобу реактивҳои бештар лозиманд ва плазмиди ҳуҷайраҳои зинда аз сабаби қавӣ будани афзоиш ва такрористеҳсолии ҳуҷайраҳои зинда эҳтимоли олуда шуданро дорад.
Ифлосшавии маҳсулоти пурқувватшуда мушкилоти маъмултарини ифлосшавӣ дар реаксияҳои PCR мебошад.Азбаски миқдори нусхабардории маҳсулоти ПТР калон аст (умуман 1013 нусха/мл), ки аз маҳдудияти рақами нусхаи муайянкунии PCR хеле зиёд аст, миқдори хеле ками ифлосшавии маҳсулоти PCR метавонад мусбатҳои бардурӯғро ба вуҷуд орад.
Ифлосшавии аэрозол шакли эҳтимолии ифлосшавии маҳсулоти PCR мебошад ва он инчунин осонтарин аст, ки онро нодида гирифт.Он дар натиҷаи соиш байни сатҳи моеъ ва ҳаво ба вуҷуд меояд.Умуман, ифлосшавии аэрозол метавонад ҳангоми кушодани сарпӯш, ҳангоми нафаскашии намуна ё ҳатто ҳангоми сахт такон додани найчаи реаксия ба вуҷуд ояд.Тибқи ҳисобҳо, зарраҳои аэрозол метавонад 48000 нусхаро дар бар гирад, аз ин рӯ ифлосшавии он мушкилотест, ки шоёни таваҷҷӯҳи махсус аст.
Махсусан, лабораторияҳои озмоишӣ аксар вақт барои санҷиши як гени муайян як ҷуфт праймерҳоро истифода мебаранд.Бо мурури замон, дар фазои лабораторӣ миқдори зиёди ифлосшавии маҳсулоти PCR ба амал меояд.Вақте ки чунин ифлосшавӣ рух медиҳад, онро дар муддати кӯтоҳ бартараф кардан душвор аст.
Барои се намуди аввали ифлосшавӣ мо метавонем аз воситаҳои самараноки пешгирӣ истифода барем, аммо ифлосшавии маҳсулоти ПЗР, махсусан дар сохтмони лабораторияҳои ғайристандартии ПТР пешгирӣ кардан душвор аст.Дар раванди ПТР, вақте ки нӯги пипетка моеъро мемакад ва шамол медиҳад ва сарпӯши найчаи PCR кушода мешавад, аэрозол ба вуҷуд меояд.Молекулаҳои ДНК, ки тавассути аэрозол интиқол дода мешаванд (як аэрозол метавонад даҳҳо ҳазор ДНК-ро интиқол диҳад) нест кардан душвор аст, зеро онҳо дар ҳаво шино мекунанд.Вақте ки даври навбатии таҷрибаҳои PCR ҷорӣ карда мешавад, ногузир мусбатҳои бардурӯғ пайдо мешаванд.
Тавре ки дар расми зер нишон дода шудааст, назорати манфӣ инчунин банди дахлдори таваҷҷӯҳро афзоиш дод:
Қисми якуми ин масъалаи ифлосшавӣ ва пешгирии ПТР дар ин ҷо муаррифӣ карда мешавад.Шумораи навбатӣ ба шумо қисми дуюми "Пешгирии ифлосшавии маҳсулоти PCR"-ро пешкаш мекунад, аз ин рӯ бохабар бошед!
Вақти фиристодан: июл-25-2017
