Барои стандартикунонии рафтори кормандони таҷриба SOP озмоиши PCR-ро таъсис диҳед.
Таҷрибаомӯз тартиботи амалиётро қатъиян риоя мекунад ва ифлосшавии ПТР-ро, ки метавонад бо омилҳои инсонӣ ба вуҷуд ояд, то ҳадди имкон кам мекунад ё пайдоиши ифлосшавиро пешгирӣ мекунад.Илова бар ин, таҷрибакунанда бояд дорои дониш ва малакаҳои дахлдори касбӣ, аз ҷумла малакаи корбурди таҷҳизоти марбута, аник кардани тамоми раванди кор, азхуд кардани усулҳои муолиҷаи ифлосшавӣ ва усулҳои назорати сифати лабораторӣ ва дуруст шарҳ додани натиҷаҳои санҷишро дошта бошад.
Лабораторияи стандартии PCR таъсис диҳед.
Лабораторияи ПТР асосан ба чор соҳа тақсим мешавад, яъне минтақаи омодасозии реагент, майдони коркарди намуна, майдони пурқувваткунӣ ва минтақаи таҳлили маҳсулот.Ду минтақаи аввал минтақаҳои пеш аз тақвият ва ду минтақаи охир минтақаҳои пас аз тақвият мебошанд.Минтақаи пеш аз пурқувваткунӣ ва минтақаи пас аз тақвият бояд ба таври қатъӣ ҷудо карда шавад.Маводҳои таҷрибавӣ, реактивҳо, коғази сабти, қаламҳо, маводи тозакунӣ ва ғайра метавонанд танҳо аз минтақаи пеш аз пурқувваткунӣ ба минтақаи пас аз амплификация, яъне аз минтақаи тайёр кардани реагент → майдони коркарди намуна → майдони пурқувват → майдони таҳлили маҳсулот афзоянд ва набояд ба ақиб равон шаванд.Ҷараёни ҳаво дар лаборатория инчунин бояд аз минтақаи пеш аз пурқувваткунӣ ба минтақаи пас аз пурқувватшавӣ равон шавад, на ба ақиб.Тарҳи беҳтарини лабораторияи PCR дар зер нишон дода шудааст:
Тасвири A: Ҳолати беҳтарини насби лабораторияи PCR бо фишори манфӣ дар утоқи буферӣ
Тасвири В: Ҳолати беҳтарини танзими лабораторияи PCR бо фишори мусбӣ дар утоқи буферӣ
Диаграммаҳои насби лабораторияи PCR, ки дар расми А ва расми В оварда шудаанд, бояд як ҳолати беҳтарини танзимот бошанд ва лабораторияи дорои шароит метавонад барои тарҳрезӣ ба ин режим муроҷиат кунад.Барои лабораторияҳои оддӣ тавсия дода мешавад, ки минтақаи пурзӯркунии ПТР ва минтақаи таҳлили маҳсулотро ҷудо кардан мумкин аст ва кушодани сарпӯш бояд то ҳадди имкон дар минтақаи омодасозии намуна ва минтақаи пурқувваткунии PCR кам карда шавад.Дар хотир доред: Маҳсулот ва лавозимоти таҷрибавӣ дар минтақаи таҳлили маҳсулот ба минтақаи омодасозии намуна ва минтақаи пурзӯркунии PCR ба таври қатъӣ манъ аст.
Агар лаборатория танҳо муайянкунӣ ва муайянкунии ПТР-ро анҷом диҳад, тавсия дода мешавад, ки ба ҷои ПЗР-и муқаррарӣ истифода бурдани ПЗР-и флюоресцентӣ.
Натиҷаҳои муайянкунии миқдорӣ аз ПТР-ро тавассути сигналҳои флуоресцентӣ ҷамъоварӣ ва таҳлил кардан мумкин аст, аз ин рӯ пас аз реаксия кушодани сарпӯши электрофорез лозим нест, ки аз ифлосшавии маҳсулоти ПЗР, ки дар натиҷаи ихроҷи маҳсулоти реаксия барои ташаккули аэрозолҳо ба вуҷуд омадааст, пешгирӣ мекунад.Агар шумо дар марҳилаи боркунии электрофорези гел шумораи кушодани сарпӯшро зиёд кунед, эҳтимолан ифлосшавии аэрозолҳо ба амал меояд.Тавсия дода мешавад, ки ба татбиқи ПЗР-и миқдорӣ мусоидат намуда, тадриҷан иваз кардани ПЗР-и сифатӣ.
Барои реаксияи PCR системаи ифлосшавии маҳсулоти UNG зидди PCR истифода мешавад.
Система ба ҷои dTTP dUTP-ро истифода мебарад.Пас аз реаксияи PCR, ҳама маҳсулоти ПТР (порчаҳои ДНК) бо dUTP дохил карда мешаванд;дар даври навбатии реаксияи PCR, ферменти UNG ба система иловашуда дар 37°C барои 5 дақиқа пеш аз ПЗР инкубатсия карда мешавад, ки он метавонад ҳама порчаҳои ДНК-и дорои dUTP-ро вайрон кунад ва сипас реаксияи ПТР-ро иҷро кунад.Ин метавонад ифлосшавии аэрозолро, ки аз маҳсулоти PCR ба вуҷуд омадааст, комилан бартараф кунад.Таъсир дар расми зерин нишон дода шудааст:
Эзоҳ: Барои силсилаи мустақими PCR, шумо метавонед маҳсулоти силсилаи системаи ифлосшавии маҳсулоти зидди PCR аз Foregene интихоб кунед.Пешниҳод кунед
Барои лабораторияҳое, ки санҷиши васеъмиқёси генотипиро мегузаронанд, ба ғайр аз сохтани лабораторияҳои оқилона истифода бурдани системаи ифлосшавии маҳсулоти UNG зидди PCR барои санҷиши реагентҳо тавсия дода мешавад.
Ёдоварӣ: Истифодаи ин система ифлосшавии маҳсулоти PCR-ро, ки аллакай ба вуҷуд омадааст, нест карда наметавонад.Аз ин рӯ, системаи UNG бояд дар оғози санҷиши дахлдор истифода шавад ва системаи UNG бояд барои тақвияти PCR истифода шавад, то ифлосшавии маҳсулоти PCR-ро пешгирӣ кунад.
Тавсия дода мешавад, ки ҳангоми гузаронидани санҷишҳои васеъмиқёс системаи Direct PCR-UNG Foregene истифода шавад, ба монанди:
Маҷмӯаи PCR мустақими барги растанӣ-UNG；
Маҷмӯаи PCR мустақими тухмии растанӣ-UNG；
Маҷмӯаи PCR мустақими бофтаи ҳайвонот-UNG；
Маҷмӯаи PCR мустақими муш думи муш-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Ин силсилаи маҷмӯаҳо аз Foregeneметавонад на танҳо ошкоркунии ПТР-ро зуд ва дар миқёси васеъ анҷом диҳад, балки инчунин ифлосшавии маҳсулоти ПТР-ро самаранок пешгирӣ ва назорат кунад.
Вақти фиристодан: 19 март-2021
