Шумо чӣ қадар медонед

Дар бораи Нистихроҷи кислотаи ucleic

Аввал ва охири кислотаи нуклеинӣ тозашуда

Ҳама чиз дар ибтидо мушкил аст, кислотаи нуклеинӣ тозашуда аз ҳама бештар аст

Оғози таҷрибаҳои молекулавӣ, барои таҷрибаҳои минбаъда

Муваффақият ё нокомӣ таъсири ҳалкунанда дорад.

Спектрофотометри ултрабунафш аз ҷониби бисёре аз муҳаққиқони илмӣ маъқул аст, зеро он метавонад консентратсияи кислотаи нуклеинӣ ва боқимондаҳои ионҳои сафеда ва намакро содда, зуд ва сарфакорона муайян кунад.

Тавре ки ба ҳама маълум аст, A260 маънои азхудкунии кислотаи нуклеинӣ арзиши OD, A280 маънои азхудкунии консентратсияи сафеда арзиши OD, A230 маънои абсорбсияи консентратсияи консентратсияи ионҳои намак арзиши OD, аз ин рӯ A260 метавонад консентратсияи кислотаи нуклеинро табдил диҳад, A260/280 маънои боқимондаи сафеда, A260/230 маънои боқимондаи ионҳои намакро дорад, аммо ин танҳо аз рӯи натиҷаҳои тадқиқот муайян карда шудааст.анъанавӣ” бовар кунед, ки он метавонад тозагии ДНК ва РНК-ро шарҳ диҳадба андозаи муайян.Ин ягона стандарт барои муайян кардани ҳосил ва тозагии кислотаи нуклеинӣ нест, он танҳо ҳамчун истинод истифода мешавад ва он "стандарти тиллоӣ" нест.

Дастури Thermo Fisher ND-2000 эътимоднокии натиҷаҳои санҷишро таъкид мекунад

Сабаб дар он аст, ки натиҷаҳое, ки бо истифода аз спектрофотометри микро/ултрамикро ултрабунафш ба даст оварда шудаанд, танҳо ҳосил ва тозагии кислотаи нуклеинро аз паҳлӯ инъикос мекунанд ва омилҳои зиёди таъсиркунанда мавҷуданд (роҳи оптикӣ, ҳаҷми намуна, консентратсияи намуна, арзиши рН, ионҳои дигар, ки ба андозагирии абсорбсия таъсир мерасонанд ва ғайра) , арзиши OD ченшуда ҳатман дақиқ нест.Дар айни замон, аз сабаби набудани хосияти маводи муайянкунии арзиши абсорбент, ДНК-и якқатор, ДНК-и дуқатор, РНК, dNTPs ва баъзе сафедаҳо ҳама қуллаҳои ҷаббида дар дарозии мавҷҳои 260 нм доранд ва консентратсияи танҳо аз ҷониби A260 муайяншуда ҳатман ДНК ё РНК воқеӣ нест.Тамаркуз, якпорчагӣ ва таназзули онро баҳо додан мумкин нест.

Пас, чӣ тавр ба сифати кислотаи нуклеини тозашудаи мо доварӣ кардан мумкин аст?Илова ба истифодаи спектрофотометри микро/ултрамикро ултрабунафш барои муайянкунӣ, инчунин усулҳо ба монанди электрофорези гели агарозӣ барои ба таври визуалӣ нишон додани покӣ ва якпорчагии кислотаи нуклеинӣ ва нишон додани консентратсияи то андозае заруранд.Бо ин роҳ, ҳосили кислотаи нуклеинӣ ва тозагии аз натиҷаи ошкор кардани усулҳои гуногун ба даст овардашуда эътимодбахш аст.

Муқоисаи диаграммаи таҷрибавӣ

ДНК-и геномии ҳуҷайраҳои H1299 бо истифода аз маҷмӯаҳои истихроҷи ДНК-и ширкати A истихроҷ карда шуд ва ифлосшавии назарраси наҷосат дида шуд, ки дар натиҷа арзиши баланди OD ба вуҷуд омад.

(Қимати андозагирии OD ва электроферограммаи мувофиқ)

Индекси арзёбӣ

Оё "стандарти тиллоӣ" барои ҳосили кислотаи нуклеинӣ ва санҷиши сифат вуҷуд дорад?

То ҷое ки мо медонем, усули оддӣ, зуд ва арзон вуҷуд надорад.Новобаста аз он ки ин спектрофотометр, электрофорези гелӣ ё масс-спектрометрия аст, ҳамаашон консентратсия ва тозагии кислотаи нуклеинро дар маҳлул аз паҳлӯҳои гуногун инъикос мекунанд ва онҳоро бо истинод ба ҳамдигар доварӣ кардан лозим аст.

Индекси беҳтарини арзёбӣ ҳамеша астаризаи таҷрибавии минбаъда.Он ба самаранокии транскрипсияи баръакс ва амплификацияи PCR таъсир намерасонад.Гирифтани маҳсулоти боэътимоди амплификация ва арзишҳои Ct ва ба даст овардани пайдарпайии пурра тавассути пайдарпай истихроҷи бомуваффақияти кислотаи нуклеинӣ мебошад.

Хулоса, нуқтаи назари назарияи таносуб бояд бо нуқтаи назари "истифодаи натиҷаҳои хуби таҷрибавии поёноб ҳамчун параметрҳои хуби истихроҷ" зери шубҳа гузошта шавад!

Маҷмӯаҳои истихроҷи DNA RNA-и Foregene тавсияшуда барои ба даст овардани тозагии баланди ДНК/РНК:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/