Ба наздикӣ ман як чизи аҷиберо кашф кардам!Бисёре аз мутахассисони пешрафтаи таҷриба дар атрофи ӯ ҳатто баъзе нуктаҳои дониши таҷрибавии оддиро намедонанд.

Масалан, шумо метавонед ба саволҳои зерин ҷавоб диҳед?

Оё фарқияти байни OD260 ва A260 вуҷуд дорад?Ҳар кадоми онҳо чӣ маъно дорад?
OD ихтисораи зичии оптикӣ (зичии оптикӣ), A ихтисораи абсорбсия (абсорбсия) мебошад, ду мафҳум воқеан якхелаанд, “зичии оптикӣ” “абсорбсия” аст, аммо “зичии оптикӣ” ба аксари стандартҳои миллӣ мувофиқат мекунад ва стандарти бештар аст.

Одатан мо арзиши OD-ро дар 260 нм барои ҳисоб кардани консентратсияи кислотаи нуклеин чен мекунем, пас 1OD чиро ифода мекунад?
Кислотаи нуклеинӣ қуллаи максималии ҷаббида дар дарозии мавҷи 260 нм дорад, ки он ҳам ДНК ва ҳам РНК, инчунин порчаҳои порчаҳои кислотаи нуклеинро дар бар мегирад (ин нуқтаи асосӣ аст).
Қимати OD, ки дар дарозии мавҷи 260 нм чен карда шудааст, ҳамчун OD260 сабт шудааст.Агар намуна пок бошад, арзиши OD260 метавонад консентратсияи намунаи кислотаи нуклеинро ҳисоб кунад.
1 OD260 = 50 мкг/мл dsDNA (ДНК-и дуқабата)
=37 мкг/мл ssDNA (ДНК-и якқатор)
=40 мкг/мл РНК
=30 мкг/мл dNTPs (олигонуклеотидҳо)
Оё байни RT-PCR, Realtime-PCR ва QPCR ягон робита ва фарқият вуҷуд дорад?
RT-PCR барои PCR транскрипсияи баръакс кӯтоҳ аст
PCR Time Real = qPCR, кӯтоҳ барои PCR Quantitative Time Time
Гарчанде ки PCR дар вақти воқеӣ (ПЗР-и миқдорӣ флюоресцентӣ) ва PCR транскрипсияи баръакс (ПЗР транскрипсияи баръакс) ҳарду ҳамчун RT-PCR ихтисор карда мешаванд.Аммо конвенсияи байналмилалӣ ин аст: RT-PCR махсусан ба PCR транскрипсияи баръакс ишора мекунад.

Барои тавсифи дарозии ДНК/РНК дар биология nt, bp ва kb маъмулан кадомҳоянд?
nt = нуклеотид
bp = ҷуфти асоси ҷуфти асосӣ
кб = килобаза

Албатта, шумо мегӯед, ки бисёриҳо ба ин ҷузъиёти хурд аҳамият надоранд!Ҳама ин корро мекунанд ва касе аз ту намепурсад, ки ин чист.Шумо медонед, ки ин нолозим аст, дуруст?

Не, Не, Не, инро донистан хеле зарур аст!аз он сабаб?
Зеро шумо мехоҳед мақолае нашр кунед!Бародар!Новобаста аз он ки шумо барои хатм кардани донишгоҳ ва ё аз паи дастовардҳои тадқиқоти илмӣ ҳастед, шумо бояд ба мақолаҳо такя кунед!

Истеҳсоли кислотаи нуклеинӣ бояд таҷрибаи соддатарин ва асосӣ бошад.Сифати истихроҷи кислотаи нуклеинӣ бевосита натиҷаҳои таҷрибаҳои минбаъдаро муайян мекунад.

Харчанд борхо гуфта бошам хам, дустоне, ки парво надоранд.Ин дафъа ман қарор додам, ки аз мақола хориҷ шавам!

Маълумоти ҳадди ақал барои нашри таҷрибаҳои миқдорӣ дар вақти воқеӣ PCR, ки MIQE номида мешавад, маҷмӯи дастурҳои таҷрибаҳои миқдорӣ флуорессент аст, ки дар сатҳи байналмилалӣ ҷорӣ карда шудааст, ки стандартҳои ҳадди ақали иттилооти таҷрибавиро барои арзёбии таҷрибаҳои миқдорӣ дар ПТР ва интишори мақолаҳо пешниҳод мекунад.Тавассути шароитҳои таҷрибавӣ ва усулҳои таҳлили аз ҷониби таҷрибакунанда пешниҳодшуда, баррасикунандагон метавонанд дурустии нақшаи таҷрибавии тадқиқотчӣ беҳтар арзёбӣ кунанд.

Мумкин аст, ки дар бахши истихроҷи кислотаи нуклеинӣ чизҳои зерини муайянкунӣ пешниҳод карда шудаанд:

"E" маълумотеро нишон медиҳад, ки бояд пешниҳод карда шаванд ва "D" маълумотеро нишон медиҳад, ки дар ҳолати зарурӣ бояд пешниҳод карда шаванд.

Шакл хеле мураккаб аст, дар асл, гуфтаниам, ки ҳама бояд аз он оғоз кунанд

покӣ (D), ҳосил (D), якпорчагӣ (E) ва мувофиқат (E) барои арзёбии кислотаҳои нуклеинӣ дар ин чаҳор ҷанба.

Мувофиқи одатҳои таҷрибавӣ, аввал дар бораи усулҳои баҳодиҳии покӣ ва тамаркуз сухан гӯед.

Андозаи OD усули дӯстдошта ва осонтарини муайян кардани озмоишгарон мебошад.Дар бораи принцип бошад, ман дар ин чо ба тафсилот намеравам.Ҳоло бисёр лабораторияҳо барои таҳлили миқдории намунаҳои кислотаи нуклеинӣ аз спектрофотометрҳои ултрамикро истифода мебаранд.Ҳангоми нишон додани арзиши абсорбент, барнома бевосита арзиши консентратсияи (кислотаи нуклеинӣ, сафеда ва рангҳои флуоресцентӣ) ва таносуби алоқамандро медиҳад.Дар мавриди таҳлили арзиши OD, ин расмро захира кунед ва шумо хуб хоҳед буд.

Рӯйхати ҳалли арзиши универсалии OD

Бо вуҷуди ин, якчанд огоҳиҳо мавҷуданд, ки бояд барои шумо алоҳида оварда шаванд.

(Охир, ман медонам, ки шумо бояд онҳое бошед, ки захира кунед ва то он даме, ки ба онҳо ниёз доред, интизор шавед!)

Эзоҳ 1 Таҷҳизот

Ба арзиши OD таҷҳизоти гуногун таъсир мерасонад.То он даме, ки OD260 дар доираи муайян қарор дорад, арзишҳои OD230 ва OD280 маъно доранд.Масалан, диапазони азхудкунии Eppendorf D30 маъмул дар 260 нм 0 ~ 3А ва NanoDrop One of Thermo дар 260 нм аст.Диапазони ҷаббида аз 0,5 ~ 62,5А.

Эзоҳ 2Реагенти ҳалкунанда

Қимати OD метавонад тавассути ҳалкунии реагентҳои гуногун таъсир расонад.Масалан, хониши OD260/280 аз РНК тозашуда дар pH7,5 10мм Трисбуфер дар байни 1,9-2,1 аст, дар ҳоле ки дармаҳлули обии бетарафтаносуб камтар мешавад, шояд ҳамагӣ 1,8-2,0 бошад, аммо ин маънои онро надорад, ки сифати РНК Фарқиятро тағйир медиҳад.

Эзоҳ 3Моддаҳои боқимонда

Мавҷудияти моддаҳои боқимонда ба дурустии ченкунии консентратсияи кислотаи нуклеинӣ таъсир мерасонад, аз ин рӯ дар намунаҳои кислотаи нуклеинӣ аз боқимондаҳои сафеда, фенол, полисахарид ва полифенол то ҳадди имкон канорагирӣ кардан лозим аст.

Аммо, дар асл, истихроҷ бо реагентҳои органикӣ як усули кӯҳна аст.Дар маҷмӯаҳои тиҷоратӣ, таъсири истихроҷро тавассути сутуни адсорбсияи кремний дар якҷоягӣ бо центрифугакунӣ, пешгирӣ кардани реагентҳои органикии заҳролуд ва зараровар, ки хориҷ кардан душвор аст ва ғайра ба даст овардан мумкин аст. Мушкилот, ба монандиМаҷмӯаи истихроҷи кислотаи нуклеинии Foregene, дар давоми амалиёт DNase/RNase ва реагентҳои органикии заҳролудро истифода намекунад, зуд ва бехатар, ватаъсир астхуб(тасодуфан гуфт, ки он бемӯй буд, аммо ман медонам, ки шумо донистан мехоҳед).

Мисоли 1: Ҳосили истихроҷи геномии ДНК ва тозагӣ

Маҷмӯаи изолятсияи DNA хоки Foregene (DE-05511) намунаҳои хокро аз манбаъҳои гуногун коркард мекунад ва миқдор ва тозагии ДНК-и геномии ба даст овардашуда дар ҷадвали зерин нишон дода шудааст:
Мисоли 2: Ҳосили истихроҷи РНК-и бофта ва тозагӣ

Маҷмӯаи изолятсияи умумии RNA Animal (RE-03012) намунаҳои гуногуни бофтаро коркард кардааст ва миқдор ва тозагии РНК гирифташуда дар ҷадвали зер нишон дода шудааст (барои бофтаи муш):
Аммо, фикр накунед, ки шумо бо арзиши OD анҷом додаед.Оё шумо дар бораи нуктаҳои калидӣ, ки ман дар пеш барои шумо кашидам, ғамхорӣ доред?

Огоҳӣ

Молекулаҳои пора-порашудаи кислотаи нуклеинӣ низ дар абсорбенс ҳисоб карда мешаванд.Фарз мекунем, ки шумо дар РНК боқимондаҳои геномии ДНК доред, арзиши OD-и шумо хеле баланд ба назар мерасад, аммо консентратсияи воқеии РНК муайян карда намешавад.Новобаста аз он ки РНК-и шумо аст, маълум нест, ки оё таназзул вуҷуд дорад, аз ин рӯ ба мо то ҳол ба усули мукаммали арзёбӣ лозим аст, то баҳодиҳии дақиқтаре диҳем, яъне баҳодиҳии якпорчагии кислотаи нуклеинӣ, ки дар MIQE зикр шудааст.