• Фейсбук
  • Linkedin
  • youtube

Таносуби пасти A260/A230 одатан аз ифлосиҳо бо дарозии максималии ҷаббида дар 230 нм ба вуҷуд меояд.Биёед бубинем, ки ин ифлосиҳо чиро дар бар мегиранд:

  • ифлоскунандаҳои маъмул

    Дарозии мавҷи абсорбсия

    Таъсири таносуб

    Протеин

    ~ 230нм ва 280нм

    Дар як вақт кам кардани А260/A 280ва А260/A 280таносуби

    Намаки гуанидин

    220-240 нм

    Кам кардани А260/A 280таносуби

    Фенол

    ~ 270нм

    -

    Тризол

    ~ 230нм ва 270нм

    Кам кардани А260/A 280таносуби

    EDTA

    ~230нм

    Кам кардани А260/A 280таносуби

    Этанол

    230-240 нм

    Кам кардани А260/A 280таносуби

 
 
 
Дарозии мавҷҳои азхудкунӣ ва арзиши контрасти ифлоскунандаҳои умумӣ

Pифлосшавии ротеин
Ифлосшавии сафедаҳоро метавон ҳамчун ифлосшавии маъмултарин дар раванди истихроҷи кислотаи нуклеинӣ баррасӣ кард.Протеин дар байни фазаи обии боло ва поён мавҷуд асторганикӣмарҳила.Ифлосшавӣ таносуби A260/A280 ва A260/A230-ро дар як вақт коҳиш медиҳад ва таносуби A260/A230 нисбат ба таносуби A260/A280 равшантар тағйир меёбад.
Дар давоми минбаъдатранскрипсияи баръаксor реаксияҳои qPCR, боқимондаҳои сафеда метавонанд ба фаъолияти фермент халал расонанд ё халал расонанд.Роҳи беҳтарини пешгирӣ кардани ифлосшавии сафеда ин дар хотир нигоҳ доштани принсипи «на камтар аз бештар, миқдори ками чанд маротиба» ҳангоми аспиратсияи супернатант мебошад.

2. Ифлосшавии гуанидин
гидрохлорид (GuHCl) ва гуанидин тиоцианат (GTC) таъсири денатуризатсияи сафедаҳо доранд, ки метавонанд дар ҷараёни истихроҷи кислотаи нуклеинӣ мембранаҳои ҳуҷайраро зуд вайрон кунанд ва боиси денатуратсияи сафедаҳо ва боришот шаванд.Дарозии мавҷи азхудкунии GuHCl ва GTC дар байни 220-240 нм ванамаки гуанидинии боқимонда таносуби A260/A230-ро коҳиш медиҳад.Гарчанде намаки боқимондаи гуанидиний таносубро коҳиш медиҳад,таъсир ба таҷрибаҳои поёноб воқеан ночиз аст.

3. Олудашавии Тризол
Ҷузъи асосии Trizol фенол мебошад.Вазифаи асосии фенол ин лизинги ҳуҷайраҳо ва озод кардани сафедаҳо ва моддаҳои кислотаи нуклеинӣ дар ҳуҷайраҳо мебошад.Гарчанде ки фенол метавонад сафедаҳоро ба таври муассир денатурат кунад, он наметавонад фаъолияти RNase-ро пурра боздорад.Аз ин рӯ, ба ТРИзол 8-гидроксихинолин, гуанидин изотиоцианат, β-меркаптоетанол ва ғайра илова карда мешаванд, то RNase эндогенӣ ва экзогениро боздоранд.
Ҳангоми истихроҷи РНК-и ҳуҷайра, Тризол метавонад ҳуҷайраҳоро зуд лиз кунад ва нуклеазаи аз ҳуҷайраҳо хориҷшударо боздорад ва Тризол боқимонда таносуби A260/A230-ро ба таври назаррас коҳиш медиҳад.
Усули коркард: Ҳангоми центрифугакунӣ бояд қайд кард, ки фенол дар Тризол дар фазаи об дар ҳолати 4° ва ҳарорати хонагӣ ба осонӣ ҳал мешавад.

4. Боқимондаи этанол
Этанол дар раванди ниҳоӣ барои таҳшин кардани ДНК ҳангоми обшавии ионҳои намак, ки метавонанд ба ДНК пайваст шаванд, истифода мешавад.Дарозии мавҷи азхудкунии баландтаринқуллаи азхудкунииэтанол низ дар 230-240 нм, киниз таносуби A260 / A230 кам хоҳад кард.
Усули пешгирӣ кардани боқимондаи этанолро дар давоми елюцияи ниҳоӣ ду маротиба такрор кардан мумкин астсарпӯши дудто ду дақиқа пеш аз илова кардани буфер барои элюсия этанол пурра бухор шавад.
Бо вуҷуди ин, бояд маълум бошад, ки таносуб танҳо нишондиҳандаи арзёбии сифати РНК мебошад.Агар амалиёти дар боло зикршуда ба таври қатъӣ танзим карда шавад, фарқияти байни таносуб ва диапазони стандартӣ ба таҷрибаҳои поёноб таъсири калон намерасонад.
Маҳсулоти марбут:
Маҷмӯаи изолятсияи умумии RNA Animal
Маҷмӯаи изолятсияи RNA Total Plant
Маҷмӯаи изолятсияи умумии RNA Cell
Маҷмӯаи изолятсияи умумии RNA Plant Plus


Вақти фиристодан: феврал-10-2023