• Фейсбук
  • Linkedin
  • youtube
саҳифа_баннер

Маҷмӯаи изолятсияи умумии RNA аз ҳайвонот Маҷмӯаҳои умумии истихроҷ ва тозакунии РНК барои бофтаҳо ва ҳуҷайраҳои ҳайвонот

Тавсифи маҷмӯа:

Аз бофтаҳои гуногуни ҳайвонот РНК-и умумии тоза ва хушсифатро зуд ва самаранок истихроҷ кунед.

Дар бораи таназзули РНК хавотир шудан лозим нест.Тамоми система RNase-Free аст

Бо истифода аз сутуни DNA-Cleaning ДНК-ро самаранок нест кунед

ДНК-ро бе илова кардани DNase хориҷ кунед

Оддӣ - ҳама амалиётҳо дар ҳарорати хонагӣ анҷом дода мешаванд

Зуд - амалиётро дар 30 дақиқа анҷом додан мумкин аст

Бехатар - ягон реактиви органикӣ истифода намешавад

тозагии баланд - OD260/280≈1,8-2,1

қувваи пешина


Тафсилоти маҳсулот

Тегҳои маҳсулот

Саволҳои зиёд такрормешуда

Тавсифи маҷмӯаҳо

50 омодагӣ, 200 омодагӣ

Ин маҷмӯа истифода мебарадсутуни чархзанӣ ва формулааз ҷониби ширкати мо таҳия шудааст, ки метавонад РНК-и баландсифат ва сифати баландро аз бофтаҳои гуногуни ҳайвонот бо самаранокии баланд истихроҷ кунад. Сутуни самараноки ДНК-тозакуниро таъмин мекунад, ки метавонад ДНК-и геномиро аз супернатант ва лизати матоъ ба осонӣ ҷудо ва adsorb кунад, содда ва вақтро сарфа мекунад;Сутуни танҳо RNA метавонад РНК-ро ба таври муассир пайваст кунад ва онро ҳамзамон бо формулаи беназир коркард кардан мумкин аст Бисёр намунаҳо.

Тамоми система RNase-Free аст, то РНК-и истихроҷшуда вайрон нашавад;Буфери RW1, буфери RW2 системаи шустани буферӣ, то ки РНК-и гирифташуда аз сафеда, ДНК, ион ва ифлосшавии пайвастагиҳои органикӣ озод бошад.

Компонентҳои комплект

Маҷмӯаи изолятсияи умумии RNA Animal
Компонентҳои комплект RE-03011 RE-03014
50 Т 200 Т
Буфери RL1* 25 мл 100 мл
Буфери RL2 15 мл 60 мл
Буфери RW1* 25 мл 100 мл
Буфери RW2 24 мл 96 мл
RNase-Free ddH2O 10 мл 40 мл
Сутуни танҳо RNA 50 200
Сутуни тозакунии ДНК 50 200
Дастури дастурӣ 1 дона 1 дона

 

Маълумоти маҳсулот

Формат Сутуни чархзанӣ Компоненти тозакунӣ Сутуни пештара, реактив
Флюс 1-24 намуна Вақт барои омодагӣ ~30 дақиқа (24 намуна)
Центрифуга Сентрифугаи мизи корӣ Ҷудокунии пиролиз Ҷудокунии центрифуга
Намуна бофтаи ҳайвонот;ҳуҷайра Миқдори намунаҳо бофта: 10-20 мг;Ҳуҷайра: (1-5) × 106
Ҳаҷми элюзия 50-200 мкл Ҳаҷми ҳадди аксар боркунӣ 850 мкл

 

Хусусиятҳо ва афзалиятҳо

■ Дар бораи таназзули РНК хавотир шудан лозим нест;тамоми система RNase-Free аст
■ Сутуни тозакунии ДНК-ро бо истифода аз ДНК самаранок нест кунед
■ ДНК-ро бе илова кардани DNase хориҷ кунед
■ Оддӣ-тамоми амалиётҳо дар ҳарорати хонагӣ анҷом дода мешаванд
■ Амалиёти зудро дар 30 дақиқа анҷом додан мумкин аст
■ Бехатар-реагенти органикӣ лозим нест
■ тозагии баланд -OD260/280≈1,8-2,1

бартариҳои маҷмӯаи изолятсияи foregene RNA

Аризаи маҷмӯа

Он барои истихроҷ ва тозакунии умумии РНК аз бофтаҳои гуногуни ҳайвоноти тару тоза ё яхкардашуда ё ҳуҷайраҳои парваришшуда мувофиқ аст.

Параметрҳои маҳсулот

■ Барномаҳои поёноб: синтези аввалини cDNA, RT-PCR, клонкунии молекулавӣ, Northern Blot ва ғайра.
■ Намунахо: бофтахои хайвонот, хучайрахои культивацияшуда
■ Микдори: Бофтаҳо 10-20мг, Ҳуҷайраҳо (2-5) × 106
■ Иқтидори ҳадди аксар пайваст кардани ДНК-и сутуни тозакунӣ: 80 мкг
■ Ҳаҷми элюсия: 50-200 мкл

Ҳайвоноти умумии RNA - ҷараёни кори оддӣ

Диаграмма

Маҷмӯаи изолятсияи умумии RNA Animal, 20 мг табобат карда мешавад
Намунаҳои тозаи муш, 5% РНК-и умумии тозашуда 1% агар гиред

Электрофорези гликогел
1: Испурч 2: Гурда
3: Ҷигар 4: Дил

Муҳлати нигоҳдорӣ ва нигоҳдорӣ

Маҷмӯаро дар ҳарорати хонагӣ (15–25 ℃) ё 2–8 ℃ барои муддати дарозтар нигоҳ доштан мумкин аст.Буфери RL1-ро пас аз илова кардани β-меркаптоэтанол (ихтиёрӣ) дар ҳарорати 4 ℃ барои 1 моҳ нигоҳ доштан мумкин аст.

Мақолаҳои иқтибосшуда

1.АГАР: 18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.Нанозарраҳои ба липид монанд ба mRNA боршуда барои таҳрири пойгоҳи ҷигар тавассути оптимизатсияи тарроҳии марказии композитӣ.Adv.Функсия.Матер.2021, 31, 2011068.дои:10.1002/adfm.202011068.

2.АГАР: 18.187:Ҳе X, Ҳонг В, Янг Ҷ, ва дигарон.Апоптози стихиявии ҳуҷайраҳо дар тайёр кардани ҳуҷайраҳои терапевтӣ тавассути баровардани фосфатидилсерин таъсири иммуномодуляторӣ мерасонад.Ҳадафи интиқоли сигнал Ther.2021 июл 14;6(1):270.дои: 10.1038 / s41392-021-00688-з.

3.АГАР: 17.97:Dai Z, Liu H, Liao J ва дигарон.Модификатсияи N7-Methylguanosine tRNA тарҷумаи онкогении mRNA-ро такмил медиҳад ва ба пешрафти холангиокарцинома дар дохили ҷигар мусоидат мекунад.Мол ҳуҷайра.2021 июл 29: S1097-2765 (21) 00555-4.дои: 10.1016 / j.molcel.2021.07.003.

4.АГАР: 9.225: Cao X, Shu Y, Chen Y ва дигарон.Тағироти Mettl14-миёнадори m6A ба барқарорсозии ҷигар тавассути нигоҳ доштани гомеостази ретикулуми эндоплазма мусоидат мекунад.Мол гастроэнтерол гепатол ҳуҷайра.2021;12(2):633-651.дои: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.

 

Маҷмӯаҳои изолятсияи РНК барои дигар манбаъҳои намунавӣдастрас мебошанд:

Ҳуҷайра, растанӣ, вирусӣ, хун ва ғ.


  • гузашта:
  • Баъдӣ:

  • РНК истихроҷ карда намешавад ё ҳосили РНК паст аст

    Аксар вақт омилҳои гуногуне мавҷуданд, ки ба самаранокии барқарорсозӣ таъсир мерасонанд, ба монанди: мундариҷаи намунаи RNA бофта, усули кор, ҳаҷми элюсия ва ғайра.

    1. Ҳангоми кор ваннаи ях ё центрифугаи криогенӣ (4 °C) анҷом дода шуд.

    Тавсия: Дар давоми тамоми раванд дар ҳарорати хонагӣ (15-25 ° C) кор кунед, ванна ях накунед ва дар ҳарорати паст центрифуга накунед.

    2. Нигоҳдории нодурусти намуна ё вақти аз ҳад зиёди нигоҳдории намуна.

    Тавсия: Намунаҳоро дар -80 °C нигоҳ доред ё дар нитрогени моеъ ях кунед ва аз истифодаи такрории яхкунӣ худдорӣ кунед;кӯшиш кунед, ки барои истихроҷи РНК бофтаи тару тоза ё ҳуҷайраҳои парваришшударо истифода баред.

    3. Лизиси нокифояи намуна.

    Тавсия: Ҳангоми гомогенизатсияи матоъ, боварӣ ҳосил кунед, ки матоъ ба таври кофӣ гомогенизатсия карда шудааст ва ҳуҷайраҳои бофта барои шарҳ додани озодшавии РНК ба қадри кофӣ тақсим шудаанд.

    4. Элюент дуруст илова карда нашудааст.

    Тавсия: Тасдиқ кунед, ки RNase-Free ddH2О ба мобайни мембранаи сутуни тозакунӣ қатра илова карда мешавад.

    5. Ҳаҷми дурусти этаноли мутлақ ба Buffer RL2 ё Buffer RW2 илова карда нашудааст.

    Тавсия: Дастурҳоро риоя кунед, ҳаҷми дурусти этаноли мутлақро ба Buffer RL2 ва Buffer RW2 илова кунед ва пеш аз истифодаи маҷмӯа хуб омехта кунед.

    6. Миқдори намунаи матоъ мувофиқ нест.

    Тавсия: 10-20 мг матоъ ё (1-5) × 10 истифода баред6ҳуҷайраҳо барои 500 мкл буфери RL1, зеро истифодаи аз ҳад зиёди бофта метавонад боиси коҳиши истихроҷи РНК гардад.

    7. Ҳаҷми элюсияи номатлуб ё элюсияи нопурра.

    Тавсия: Ҳаҷми элюсияи сутуни тозакунӣ 50-200 мкл;агар таъсири элюсия қаноатбахш набошад, тавсия дода мешавад, ки вақти ҷойгиркунии ҳарорати хонагӣ пас аз илова кардани RNase-Free ddH пешакӣ гармшуда дароз карда шавад.2О, масалан, барои 5-10 дақиқа.

    8.Сутуни тозакунӣ пас аз шустани буферии RW2 боқимондаи этанол дорад.

    Тавсия: Агар пас аз шустани буфери RW2 боқимондаи этанол вуҷуд дошта бошад, центрифугаи холии найча барои 1 дақиқа, вақт барои амалиёти центрифугакунии холии найча метавонад то 2 дақиқа зиёд карда шавад ё сутуни тозакунӣ метавонад дар ҳарорати хонагӣ барои 5 дақиқа ҷойгир карда шавад, то ки боқимондаи этанол хориҷ карда шавад.

    РНК-и тозашуда вайрон мешавад

    Сифати РНК-и тозашуда бо омилҳо ба монанди нигоҳдории намуна, ифлосшавии RNase ва манипуляция ва ғайра алоқаманд аст.

    1. Намунахои бофтахо дар вакташ нигох дошта намешаванд.

    Тавсия: Агар намунаҳои матоъ ё ҳуҷайраҳо пас аз ҷамъоварӣ сари вақт истифода нашаванд, фавран дар ҳарорати -80 °C ё нитрогени моеъ криоконсерватсия кунед.Барои истихроҷи РНК, агар имкон бошад, бофтаи нав гирифташуда ё намунаи ҳуҷайраро истифода баред.

    2. Бозобшавии такрории намунаҳои бофта.

    Тавсия: Ҳангоми нигоҳ доштани намунаҳои матоъ, беҳтар аст, ки онҳоро ба қисмҳои хурд барои нигоҳдорӣ буред ва ҳангоми истифодаи онҳо яке аз пораҳоро хориҷ кунед, то такроран яхобшавии намуна ва таназзули РНК пешгирӣ карда шавад.

    3. RNase ҷорӣ карда мешавад ё напӯшидани дастпӯшакҳои якдафъаина, ниқобҳо ва ғ.

    Тавсия: Таҷрибаҳои истихроҷи РНК беҳтарин дар утоқҳои алоҳидаи коркарди РНК анҷом дода мешаванд ва ҷадвал пеш аз таҷриба тоза карда мешавад.

    Ҳангоми озмоиш дастпӯшакҳо ва ниқобҳои якдафъаина пӯшед, то таназзули РНК, ки дар натиҷаи ворид кардани RNase ба вуҷуд омадааст, кам кунед.

    4. Ҳангоми истифода реактивҳо бо RNase олуда мешаванд.

    Тавсия: Бо маҷмӯаи нави изолятсияи RNA Animal Total RNA барои таҷрибаҳои алоқаманд иваз кунед.

    5. Қубурҳои центрифуга, маслиҳатҳо ва ғайра, ки дар коркарди РНК истифода мешаванд, бо RNase олуда шудаанд.

    Тавсия: Тасдиқ кунед, ки қубурҳои центрифуга, маслиҳатҳо, пипеткаҳо ва ғ., ки дар истихроҷи РНК истифода мешаванд, ҳама аз RNase озоданд.

    РНК-и тозашуда ба таҷрибаҳои поёноб таъсир мерасонад

    РНК, ки аз ҷониби сутуни тозакунӣ тоза карда шудааст, агар ионҳои намак, миқдори сафеда хеле калон бошад, ба таҷрибаи поёноб таъсир мерасонад, ба монанди: транскрипсияи баръакс, Northern Blot et al.

    1. РНК-и элюсияшуда дорои пасмондаҳои ионҳои намак мебошад.

    Тавсия: Тасдиқ кунед, ки ҳаҷми дурусти этанол ба буфери RW2 илова карда шудааст ва 2 шустушӯи сутуни тозакуниро бо суръати центрифугаи барои кор нишондода анҷом диҳед;агар ягон боқимондаи ионҳои намак мавҷуд бошад, сутуни тозакуниро дар буфери RW2 барои 5 дақиқа дар ҳарорати хонагӣ гузоред ва центрифугаро анҷом диҳед, то ҳадди аксар бартараф кардани ифлосшавии намакро анҷом диҳед.

    2. Боқимондаи этанол дар РНК-и элютсионӣ.

    Тавсия: Тасдиқ кунед, ки пас аз шустани буфери RW2, амалиёти центрифугакунии холии найчаро бо суръати барои кор нишондодашуда иҷро кунед, вақти амалиёти центрифугакунии холии найчаро то 2 дақиқа зиёд кунед, агар боқимондаи этанол вуҷуд дошта бошад ё онро дар ҳарорати хонагӣ барои 5 дақиқа пас аз аз нав барқарор кардани найчаи холии центрифугатсия гузоред.

    Паёми худро дар ин ҷо нависед ва ба мо бифиристед