Протоколи маҷмӯаи PCR мустақими бофтаи ҳайвонот (бе асбобҳои намунагирӣ).
Тавсифҳо
Ин маҷмӯа системаи беназири буферии лизисро барои зуд озод кардани ДНК-и геномӣ аз намунаҳои бофтаи ҳайвонот барои реаксияҳои PCR истифода мебарад, аз ин рӯ он махсусан барои санҷиши генетикии васеъмиқёс мувофиқ аст.
Раванди озод кардани ДНК-и геномӣ аз буфери лизис дар давоми 10-30 дақиқа дар 65 ° C анҷом меёбад.Ҳеҷ гуна равандҳои дигар, ба монанди хориҷ кардани сафеда ва РНК талаб карда намешаванд ва ДНК-и микросхемаҳои озодшуда метавонад ҳамчун қолаб барои реаксияи PCR истифода шавад.
2 × PCR осонTMМикс ба ингибиторҳои реаксияи PCR таҳаммулпазирии қавӣ дорад ва метавонад лизати намунаро барои санҷида ҳамчун қолаб барои пурқувваткунии муассир ва мушаххас истифода барад.Ин реагент дорои Foregene D-Taq DNAPolymerase, dNTPs, MgCl мебошад.2, буфери реаксия, оптимизатори PCR ва стабилизатор.
D-Taq DNA полимераза як полимерази ДНК мебошад, ки аз ҷониби Foregene махсус барои реаксияҳои мустақими PCR таҳия шудааст.Полимеразаи D-Taq DNA ба як қатор ингибиторҳои реаксияи ПТР таҳаммулпазирии қавӣ дорад ва метавонад миқдори микроэлементҳои ДНК-ро дар системаҳои гуногуни реаксияҳои мураккаб ба таври муассир афзоиш диҳад ва суръати афзоиш метавонад ба 2Кб/дақ расад, ки махсусан барои реаксияи мустақими PCR мувофиқ аст.
Мушаххасоти
50×20µl rxns, 200×20µl rxns, 500×20µl rxns, 2000×20µl rxns
Компонентҳои комплект
Қисми I | Буфер AL |
Протеазаи Форген | |
6 × буфери боркунии ДНК | |
Қисми II | 2 × PCR осонTMОмезед |
Хусусиятҳо ва афзалиятҳо
■Тозакунии ДНК вақти зиёдро талаб намекунад
■ Талаботи намунавӣ кам аст, то 5 мг бофтаи ҳайвонотро санҷидан мумкин аст.
■ Табобати махсус ба монанди суфта кардан ва майда кардан лозим нест ва амалиёт содда аст.
■ Системаи оптимизатсияшудаи ПТР имкон медиҳад, ки ПЗР хусусияти баландтар ва таҳаммулпазирии қавитар ба ингибиторҳои реаксияи ПТР дошта бошад.
Параметрҳои маҷмӯа
Ариза: бофтаҳои гуногуни ҳайвонот.
ДНК аз лизиси намуна озод карда шудааст: танҳо ҳамчун қолаби PCR истифода мешавад.
Маҷмӯа метавонад барои мақсадҳои зерин истифода шавад: муайян кардани трансгеноз, генотипсозии ҳайвонот ва ғайра.
Раванди кор
Нигоҳдорӣ ва мӯҳлати нигоҳдорӣ
Қисми I ин маҷмӯа бояд дар 2-8 нигоҳ дошта шавад℃.
Реагенти Buffer AL-ро дар шароити хушк барои 12 моҳ нигоҳ доштан мумкин аст;дар 2—8 нигох доштан мумкин аст℃барои нигоҳдории дарозтар.
Reagent Foregene Protease дорои формулаи беназир аст.Барои таъмини фаъолият ва устувории он, лутфан онро дар 4 нигоҳ доред℃барои 12 мох.
Реактив 6×Буфери боркунии ДНК метавонад дар 4 нигоҳ дошта шавад℃ё -20℃ба муддати дуру дароз.
Қисми II ин маҷмӯа бояд дар -20 нигоҳ дошта шавад℃.
Реактив 2×PCR осонTMОмехта метавонад барои 12 моҳ дар -20 нигоҳ дошта шавад℃;агар он зуд-зуд истифода шавад, онро дар 4 низ нигоҳ доштан мумкин аст℃барои нигоҳдории кӯтоҳмуддат (дар давоми 10 рӯз истифода мешавад).