• Фейсбук
  • Linkedin
  • youtube
саҳифа_баннер

Маҷмӯаи Cell Direct RT qPCR—SYBR GREEN I Маҷмӯаҳои бевоситаи ҳуҷайраҳои лизиси ҳуҷайраи омодаи як қадами qRT-PCR

Тавсифи маҷмӯа:

Cat.№DRT-01011/01012

Барои ҳуҷайраҳои мустақими RT-qPCR бо истифода аз 10-1,000,000 ҳуҷайра,

ва иҷрои RT-qPCR бевосита аз ҳуҷайраҳо бе тозакунии пешакии РНК.

Ҳуҷайраҳо мустақиман лизис карда мешаванд, то РНК-ро барои RT-qPCR озод кунанд;системаи таҳаммулпазирии баланд тоза кардани РНК ва бевосита истифода бурдани лизатҳои ҳуҷайраро ҳамчун қолибҳои РНК барои реаксияҳои РТ нолозим месозад.Тез ва қулай;ҳассосияти баланд, хосияти қавӣ ва устувории хуб.

◮ Содда ва самаранок: бо технологияи Cell Direct RT, намунаҳои РНК-ро ҳамагӣ дар 7 дақиқа ба даст овардан мумкин аст.

Талаботи намунавӣ хурд аст, то 10 ҳуҷайраро санҷидан мумкин аст.

◮Гузариши баланд: он метавонад РНК-ро дар ҳуҷайраҳои дар 384, 96, 24, 12, 6-чоҳҳо парваришшуда зуд муайян кунад.

DNA Eraser метавонад геномҳои озодшударо зуд хориҷ кунад ва таъсирро ба натиҷаҳои минбаъдаи таҷрибавӣ хеле кам кунад.

Системаи оптимизатсияшудаи RT ва qPCR транскрипсияи баръакси ду марҳилаи RT-PCR-ро самараноктар ва PCR-ро мушаххастар ва ба ингибиторҳои реаксияи RT-qPCR тобовартар мекунад.


Тафсилоти маҳсулот

Тегҳои маҳсулот

Саволҳои зиёд такрормешуда

Зеркашӣ кардани захираҳо

Тавсифҳо

Ин маҷмӯа як системаи беназири буферии лизисро истифода мебарад, ки метавонад РНК-ро аз намунаҳои ҳуҷайраҳои парваришшуда барои аксуламалҳои RT-qPCR зуд озод кунад ва ба ин васила раванди тозакунии РНК-ро аз байн мебарад.Шаблони РНК-ро танҳо дар 7 дақиқа ба даст овардан мумкин аст.5×Миксҳои мустақими RT ва 2×Реагентҳои мустақими qPCR Mix-SYBR, ки аз ҷониби маҷмӯа пешниҳод шудаанд, метавонанд зуд ва ба таври муассир натиҷаҳои миқдории PCR-ро дар вақти воқеӣ ба даст оранд.

5×Миксҳои мустақими RT ва 2×qPCR мустақими Mix-SYBR таҳаммулпазирии қавии ингибиторҳо дорад ва лизати намунаҳоро метавон мустақиман ҳамчун қолаби RT-qPCR истифода бурд.Ин маҷмӯа дорои транскриптазаи баръакси RNA-и баландсифати Foregene ва полимеразаи Hot D-Taq, dNTPs, MgCl мебошад.2, буфери реаксия, оптимизатори PCR ва стабилизатор.

Мушаххасоти

200×20μл Rxns, 1000×20μl Rxns

Компонентҳои комплект

Қисми I

Буфери CL

Foregene Protease Plus II

Буфери ST

Қисми II

ДНК хаткӯркунак

5 × Омехтаи мустақими RT

2 × мустақими qPCR Mix-SYBR

50 × Ранги истинод ROX

RNase-Free ddH2O

Дастурҳо

Хусусиятҳо ва афзалиятҳо

Содда ва самаранок: бо технологияи Cell Direct RT, намунаҳои РНК-ро ҳамагӣ дар 7 дақиқа ба даст овардан мумкин аст.

■ Талаботи намунавӣ хурд аст, то 10 ҳуҷайраро санҷидан мумкин аст.

■ Қобилияти баланд: он метавонад РНК-ро дар ҳуҷайраҳои дар 384, 96, 24, 12, 6-чоҳҳо парваришшуда зуд муайян кунад.

■ DNA Eraser метавонад геномҳои озодшударо зуд тоза кунад ва таъсирро ба натиҷаҳои минбаъдаи таҷрибавӣ хеле кам кунад.

■ Системаи оптимизатсияшудаи RT ва qPCR транскрипсияи баръакси ду марҳилаи RT-PCR-ро самараноктар ва PCR-ро мушаххастар ва ба ингибиторҳои реаксияи RT-qPCR тобовартар мекунад.

Аризаи маҷмӯа

Доираи татбиқ: ҳуҷайраҳои парваришшуда.

- РНК тавассути лизиси намуна бароварда шудааст: танҳо ба қолаби RT-qPCR ин маҷмӯа татбиқ мешавад.

- Маҷмӯаро барои мақсадҳои зерин истифода бурдан мумкин аст: таҳлили ифодаи генҳо, санҷиши таъсири хомӯшкунии генҳои siRNA, скрининги маводи мухаддир ва ғайра.

Диаграмма

Диаграммаи Cell Direct RT qPCR

Нигоҳдорӣ ва мӯҳлати нигоҳдорӣ

Қисми I ин маҷмӯа бояд дар ҳарорати 4℃ нигоҳ дошта шавад;Қисми II бояд дар -20 ℃ нигоҳ дошта шавад.

 Foregene Protease Plus II бояд дар 4 дараҷа нигоҳ дошта шавад℃, дар -20 ℃ ях накунед.

 Реактив 2×qPCR Mix-SYBR мустақим бояд дар -20 нигоҳ дошта шаваддар торикӣ;агар зуд-зуд истифода бурда шавад, он метавонад дар 4 нигоҳ дошта шавад℃ барои нигоҳдории кӯтоҳмуддат (дар давоми 10 рӯз истифода мешавад).


  • гузашта:
  • Баъдӣ:

  • Принсипҳои тарроҳии праймери PCR дар вақти воқеӣ

    Праймери пеш ва праймери баръакс

    Барои PCR Real Time тарҳрезии праймер хеле муҳим аст.Примерҳо ба хусусият ва самаранокии пурқувваткунии PCR алоқаманданд ва метавонанд бо истинод ба принсипҳои зерин тарҳрезӣ шаванд:

    Дарозии ибтидоӣ: 18-30bp.

    Мазмуни GC: 40-60%.

    Арзиши Tm: Нармафзори тарроҳии Primer, ба монанди Primer 5, метавонад арзиши Tm-и праймерро диҳад.Қиматҳои Tm-и праймерҳои боло ва поён бояд ба қадри имкон наздик бошанд.Формулаи ҳисобкунии Tm низ метавонад истифода шавад: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Ҳангоми анҷом додани ПЗР, одатан ҳамчун ҳарорати гармкунӣ ҳарорати пасттар аз арзиши Tm аз 5 °C интихоб карда мешавад (афзоиши мувофиқ дар ҳарорати гармкунӣ метавонад хусусияти реаксияи PCR-ро зиёд кунад).

    Примерҳо ва маҳсулоти PCR:

    Дарозии маҳсулоти афзояндаи праймери тарроҳии PCR беҳтараш 100-150б.

    Праймерҳои тарроҳӣ дар минтақаи дуюмдараҷаи сохтории қолаб бояд то ҳадди имкон пешгирӣ карда шаванд.

    Аз ташаккули 2 ё зиёда пойгоҳҳои иловагӣ дар байни 3′ охири праймерҳои болооб ва поёноб канорагирӣ кунед.

    Пойгоҳи терминали Primer 3' наметавонад бо 3 пайдарпайи G ё C мавҷуд бошад.

    Худи праймерҳо наметавонанд сохторҳои иловагиро дошта бошанд, вагарна сохтори мӯй ба вуҷуд меояд, ки ба тақвияти PCR таъсир мерасонад.

    ATCG бояд ба қадри имкон дар пайдарпаии ибтидоӣ тақсим карда шавад ва аз пойгоҳи терминали 3' бояд ҳамчун T пешгирӣ карда шавад.

    Замимаи 1: Бастаи иловагии ҷузъҳои Cell Direct RT-qPCR Kit

    1.Маҳлули лизиси ҳуҷайра


    Маҳлули лизиси ҳуҷайра

    Компонентҳои комплект

    (24-чоҳ системаи лизис / чоҳ)

    DRT-01011-A1

    DRT-01011-A2

    100 Т

    500 Т

    ҚисмиИ

    Буфери CL

    20 мл

    100 мл

    Foregene Protease Plus II

    400 мкл

    1 мл × 2

    Буфери ST

    1 мл × 2

    10 мл

    ҚисмиII

    ДНК хаткӯркунак

    400 мкл

    1 мл × 2

    2.RT Mix


    RT Mix

    Компонентҳои комплект

    (Системаи реаксия 20 мкл)

    DRT-01011-B1

    200 Т

    5 × Омехтаи мустақими RT

    800 мкл

    RNase-Free ddH2O

    1,7 мл × 2

     

    3.qPCR омехта


    qPCR омехта

    Компонентҳои комплект

    (Системаи реаксия 20 мкл)

    DRT-01011-C1

    DRT-01011-C2

    200 Т

    1000 Т

    2 × мустақими qPCR Mix-SYBR

    1 мл × 2

    1,7 мл × 6

    50 × Ранги истинод ROX

    40 мкл

    200 мкл

    RNase-Free ddH2O

    1,7 мл

    10 мл

    Дастурҳои дастурӣ:

    QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit-SYBR Green I

    Паёми худро дар ин ҷо нависед ва ба мо бифиристед