Маҷмӯаи PCR мустақими ҳайвонот бофтаи-UNG (бе асбобҳои намунавӣ) Протокол
Тавсифи маҷмӯа:
Бевосита лизати бофтаи ҳайвонотро ҳамчун қолаб барои тақвияти PCR бидуни истихроҷи алоҳидаи ДНК, ҳассосияти зуд ва баланд истифода баред.Барои аз байн бурдани мусбатҳои бардурӯғ системаи зидди ифлосшавии UNG илова карда шуд.
◮Тозакунии ДНК вақти зиёд ва гаронбаҳо талаб карда намешавад.
◮Талаботи намунавӣ хурд аст, танҳо як дона тухм гиред.
◮Табобатҳои махсус ба монанди суфтан ва майда кардан лозим нест ва амалиёт оддӣ аст.
◮Системаи оптимизатсияшудаи ПТР ба ПТР имкон медиҳад, ки хосиятҳои баландтар ва таҳаммулпазирии қавитар ба ингибиторҳои реаксияи PCR дошта бошанд.
Тавсифҳо
Ин маҷмӯа системаи беназири буферии лизисро барои зуд озод кардани ДНК-и геномӣ аз намунаҳои бофтаи ҳайвонот барои реаксияҳои PCR истифода мебарад, аз ин рӯ он махсусан барои санҷиши генетикии васеъмиқёс мувофиқ аст.
Раванди озод кардани ДНК-и геномӣ аз буфери лизис дар давоми 10-30 дақиқа дар 65 ° C анҷом меёбад.Ҳеҷ гуна равандҳои дигар, ба монанди хориҷ кардани сафеда ва РНК талаб карда намешаванд ва ДНК-и микроэлементҳо метавонад ҳамчун қолаби реаксияи PCR истифода шавад.
2 × PCR осонTMMix (UNG) ба ҷои dTTP дар асоси 2×PCR Easy dUTP-ро истифода мебарадTMОмехта, ферменти UNG (Uracil-N-glycosylase) илова мекунад, ки метавонад дар як вақт қолаби дорои dUTP-ро вайрон кунад.Пеш аз реаксияи PCR, ферменти UNG барои таназзули маҳсулоти ПТР, ки урасил дорад, истифода мешавад.Ферментҳои UNG ба шаблоне, ки урасил надоранд, таъсир намерасонанд ва ба ин васила мушаххасӣ ва дақиқии амплификацияро таъмин мекунанд ва имкони олудашавии маҳсулоти ПЗР ҳангоми санҷиши васеъмиқёси генетикиро пешгирӣ мекунанд.
D-Taq DNA полимераза як полимерази ДНК мебошад, ки аз ҷониби Foregene махсус барои реаксияҳои мустақими PCR таҳия шудааст.Полимеразаи D-Taq DNA ба як қатор ингибиторҳои реаксияи ПТР таҳаммулпазирии қавӣ дорад ва метавонад миқдори микроэлементҳои ДНК-ро дар системаҳои гуногуни реаксияҳои мураккаб ба таври муассир афзоиш диҳад ва суръати афзоиш метавонад ба 2Кб/дақ расад, ки махсусан барои реаксияи мустақими PCR мувофиқ аст.
Компонентҳои комплект
| Қисми I | Буфер AL |
| Протеазаи Форген | |
| 6 × буфери боркунии ДНК | |
| Қисми II | 2 × PCR осонTMОмехта (UNG) |
Хусусиятҳо ва афзалиятҳо
■Тозакунии ДНК вақти зиёдро талаб намекунад
■ Талаботи намунавӣ кам аст, то 5 мг бофтаи ҳайвонотро санҷидан мумкин аст.
■ Табобати махсус ба монанди суфта кардан ва майда кардан лозим нест ва амалиёт содда аст.
■ Системаи оптимизатсияшудаи ПТР имкон медиҳад, ки ПЗР хусусияти баландтар ва таҳаммулпазирии қавитар ба ингибиторҳои реаксияи ПТР дошта бошад.
■ Системаи зидди ифлосшавии PCR 2×PCR осонTMMix (UNG) ифлосшавии маҳсулоти PCR-ро ба таври муассир нест мекунад ва мушаххасот ва дақиқии амплификацияро таъмин мекунад.
Параметрҳои маҷмӯа
Ариза: бофтаҳои гуногуни ҳайвонот.
ДНК аз лизиси намуна озод карда шудааст: танҳо ҳамчун қолаби PCR истифода мешавад.
Маҷмӯа метавонад барои мақсадҳои зерин истифода шавад: муайян кардани трансгеноз, генотипсозии ҳайвонот ва ғайра.
Раванди кор
Нигоҳдорӣ ва мӯҳлати нигоҳдорӣ
Қисми I ин маҷмӯа бояд дар 2-8 нигоҳ дошта шавад℃.
Реагенти Buffer AL-ро дар шароити хушк барои 12 моҳ нигоҳ доштан мумкин аст;дар 2—8 нигох доштан мумкин аст℃барои нигоҳдории дарозтар.
Reagent Foregene Protease дорои формулаи беназир аст.Барои таъмини фаъолият ва устувории он, лутфан онро дар 4 нигоҳ доред℃барои 12 мох.
Реактив 6×Буфери боркунии ДНК метавонад дар 4 нигоҳ дошта шавад℃ё -20℃ба муддати дуру дароз.
Қисми II ин маҷмӯа бояд дар -20 нигоҳ дошта шавад℃.
Реактив 2×PCR осонTMMix (UNG), агар он зуд-зуд истифода шавад, он метавонад дар 4 нигоҳ дошта шавад℃барои нигоҳдории кӯтоҳмуддат (дар давоми 10 рӯз истифода мешавад).
