Мо истеҳсолкунандаи ботаҷриба будем.Гирифтани аксарият дар сертификатсияҳои муҳими бозори худ барои тахфифи калон Чин Ҳассосияти баланд як қадами санҷиши Rt-QpcrМаҷмӯаи V2, Сифат ҳаёти завод аст, Таваҷҷӯҳ ба талаби муштарӣ манбаи зиндамонӣ ва рушди ширкат аст, Мо ба ростқавлӣ ва муносибати софдилона риоя мекунем ва интизори омадани шумост!
Мо истеҳсолкунандаи ботаҷриба будем.Гирифтани аксарият дар сертификатсияҳои муҳими бозори худЧин Так ДНК полимераза, Qpcr, Ширкати мо ваъда медиҳад: нархҳои оқилона, вақти кӯтоҳи истеҳсолот ва хидматрасонии қаноатбахш пас аз фурӯш, мо инчунин шуморо ба корхонаи мо дар вақти дилхоҳатон ташриф меорем.Орзу дорам, ки акнун мо як бизнеси гуворо ва дарозмуддат дошта бошем!!!

Тавсифҳо

Ин маҷмӯа як системаи беназири буферии лизисро истифода мебарад, ки метавонад РНК-ро аз намунаҳои ҳуҷайраҳои парваришшуда барои аксуламалҳои RT-qPCR зуд озод кунад ва ба ин васила раванди тозакунии РНК-ро аз байн мебарад.Шаблони РНК-ро танҳо дар 7 дақиқа ба даст овардан мумкин аст.Реагентҳои 5×Direct RT Mix ва 2×Direct qPCR Mix-SYBR, ки аз ҷониби маҷмӯа пешниҳод шудаанд, метавонанд зуд ва ба таври муассир натиҷаҳои миқдории PCR-ро дар вақти воқеӣ ба даст оранд.

5×Direct RT Mix ва 2×Direct qPCR Mix-SYBR таҳаммулпазирии қавии ингибиторҳо доранд ва лизати намунаҳоро метавон бевосита ҳамчун қолаби RT-qPCR истифода бурд.Ин маҷмӯа дорои транскриптазаи баръакси RNA-и баландсифати Foregene ва полимеразаи Hot D-Taq, dNTPs, MgCl мебошад.₂, буфери реаксия, оптимизатори PCR ва стабилизатор.

Мушаххасоти

200 × 20μl Rxns, 1000 × 20μl Rxns

Компонентҳои комплект

Хусусиятҳо ва афзалиятҳо

■ Содда ва муассир: бо технологияи Cell Direct RT намунаҳои РНК-ро ҳамагӣ дар 7 дақиқа ба даст овардан мумкин аст.

■ Талаботи намунавӣ хурд аст, то 10 ҳуҷайраро санҷидан мумкин аст.

■ Қобилияти баланд: он метавонад РНК-ро дар ҳуҷайраҳои дар 384, 96, 24, 12, 6-чоҳҳо парваришшуда зуд муайян кунад.

■ DNA Eraser метавонад геномҳои озодшударо зуд тоза кунад ва таъсирро ба натиҷаҳои минбаъдаи таҷрибавӣ хеле кам кунад.

■ Системаи оптимизатсияшудаи RT ва qPCR транскрипсияи баръакси ду марҳилаи RT-PCR-ро самараноктар ва PCR-ро мушаххастар ва ба ингибиторҳои реаксияи RT-qPCR тобовартар мекунад.

Аризаи маҷмӯа

Доираи татбиқ: ҳуҷайраҳои парваришшуда.

- РНК тавассути лизиси намуна бароварда шудааст: танҳо ба қолаби RT-qPCR ин маҷмӯа татбиқ мешавад.

- Маҷмӯаро барои мақсадҳои зерин истифода бурдан мумкин аст: таҳлили ифодаи генҳо, санҷиши таъсири хомӯшкунии генҳои siRNA, скрининги маводи мухаддир ва ғайра.

Диаграмма

Нигоҳдорӣ ва мӯҳлати нигоҳдорӣ

Қисми I ин маҷмӯа бояд дар ҳарорати 4℃ нигоҳ дошта шавад;Қисми II бояд дар -20 ℃ нигоҳ дошта шавад.

Foregene Protease Plus II бояд дар ҳарорати 4℃ нигоҳ дошта шавад, дар -20 ℃ ях накунед.

Реагенти 2×Direct qPCR Mix-SYBR бояд дар -20℃ дар торикӣ нигоҳ дошта шавад;Агар зуд-зуд истифода шавад, он метавонад дар 4 ℃ барои нигоҳдории кӯтоҳмуддат нигоҳ дошта шавад (дар давоми 10 рӯз истифода баред). Мо истеҳсолкунандаи ботаҷриба будем.Ғалаба аксариятро дар сертификатсияҳои муҳими бозор барои Big Discounting China Sensitivity High One-Step Probe Rt-Qpcr Kit V2, Сифат аст, ҳаёти фабрикавӣ , Таваҷҷӯҳ ба дархости муштарӣ манбаи зиндамонӣ ва рушди ширкат аст, Мо ба ростқавлӣ ва муносибати хуби корӣ риоя мекунем, интизори омадани шумо !
Тахфифи калонЧин Так ДНК полимераза, Qpcr, Ширкати мо ваъда медиҳад: нархҳои оқилона, вақти кӯтоҳи истеҳсолот ва хидматрасонии қаноатбахш пас аз фурӯш, мо инчунин аз шумо истиқбол мекунем, ки дар вақти дилхоҳатон ба корхонаи мо ташриф оред.Орзу дорам, ки акнун мо як бизнеси гуворо ва дарозмуддат дошта бошем!!!

QuickEасиTM Cell Direct RT-qPCR Kit -Такмan

Cat.№DRT-01021/01022

Барои ҳуҷайраи мустақими RT-qPCR бо истифода аз ≤ 1000,000 ҳуҷайра

Шиносоии маҳсулот

Ин маҳсулот системаи беназири буферии лизисро истифода мебарад, то РНК-ро аз намунаҳои ҳуҷайраҳои парваришшуда барои реаксияҳои RT-qPCR зуд озод кунад, раванди тозакунии вақти зиёд ва заҳматталаби РНК-ро аз байн мебарад ва ҳамагӣ 7 дақиқа барои ба даст овардани қолаби зарурии РНК бо 5× Direct Mix RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman, ки аз ҷониби PCR зуд ва самаранок ба даст оварда мешавад.

5× Direct RT Mix ва 2× Direct qPCR Mix-Taqman таҳаммулпазирии қавии ингибиторҳо доранд ва метавонанд бо истифода аз лизати намунае, ки ҳамчун қолаб чен карда мешавад, баръакс ва амплификацияи муассирро иҷро кунанд.Реагент дорои Транскриптазаи баръакси Foregene, Hot D-Taq DNA Polimerase, dNTPs, MgCl мебошад.₂, Reaction Buffer, Optimizer PCR ва Stabilizer, ки бо буфери лизис барои зуд ва ба осонӣ ошкор кардани намунаҳо истифода мешаванд ва дорои хусусиятҳои ҳассосият, хосият ва устувории баланд мебошанд.

Хусусиятҳои маҳсулот

Технологияи оддӣ ва муассири Cell Direct RT, ки барои гирифтани намунаҳои РНК ҳамагӣ 7 дақиқа вақтро мегирад.

Талаботи намунавӣ хурд аст ва ҳадди аққал 10 ҳуҷайраҳои парваришшударо барои таҷриба истифода бурдан мумкин аст.

Қобилияти баланд барои ба даст овардани босуръати РНК ҳуҷайраҳои парваришшуда ба монанди 384, 96, 24, 12 ва 6-чоҳ.

DNA Eraser қодир аст, ки геномҳои озодшударо зуд хориҷ кунад ва таъсирро ба натиҷаҳои минбаъдаи таҷрибавӣ хеле кам кунад.

Системаҳои оптимизатсияшудаи RT ва qPCR имкон медиҳанд, ки ду марҳилаи RT-PCR бо транскрипсияи баръакси муассиртар, хосият ва таҳаммулпазирии ингибиторҳои реаксияи RT-qPCR қавитар шавад.

Аризаи маҷмӯа

Доираи татбиқ: Ҳуҷайраҳои фарҳангӣ.

Лизиси намунавии RNA тафсиршуда: танҳо ҳамчун қолаби дуқадамонаи RT-qPCR истифода мешавад.

Маҷмӯаҳо метавонанд барои мақсадҳои зерин истифода шаванд: таҳлили ифодаи танзими ген, санҷиши аллел, скрининги маводи мухаддир ва ғайра.

Маҳдудиятҳои комплект

Қисмҳои пурқувватшуда ≤ 300 bp.

Маҷмӯаҳо барои парвариши ҳуҷайраҳои нав истифода мешаванд.

Назорати сифати маҳсулот

Мувофиқи системаи идоракунии умумии сифат FOREGENE, ҳар як бастаи маҷмӯаҳои силсилаи Cell Direct RT-qPCR чанд маротиба сахт санҷида мешавад, то эътимоднокӣ ва устувории сифати ҳар як бастаи маҷмӯаро таъмин кунад.

Мундариҷаи маҷмӯа

*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman-ро алоҳида харидан мумкин аст, тафсилот дар Замимаи 1 оварда шудааст (САҲИФАИ 13).

Шароити нигоҳдорӣ

1. Шароити интиқол

Тамоми раванди интиқоли қуттии яхбандии ҳарорати паст барои таъмини он, ки маҷмӯа дар ҳолати <4 °C аст.

2. Шароити нигоҳдорӣ

Қисми I дар ҳарорати 4°C ва Қисми II дар -20°С нигоҳ доред.

Foregene Protease Plus II бояд дар ҳарорати 4 ° C нигоҳ дошта шавад, на дар -20 ° C ях карда шавад.

Реагенти 2× Direct qPCR Mix-Taqman дар -20°C ё дар ҳарорати 4°C барои истифодаи кӯтоҳмуддат, агар зуд-зуд истифода шавад (дар давоми 10 рӯз) нигоҳ дошта мешавад.

Маълумоти ҷузъҳои маҷмӯа

Буфери CL: Муҳити заруриро барои реаксияҳои лизиси ҳуҷайра таъмин мекунад.

Буфери ST: Моддаҳои фаъолро дар лизат қатъ мекунад, то таъсир ба RT минбаъдаро пешгирӣ кунад.

DNA Eraser: тозакунандаи ДНК, таъсири бартараф кардани геном дар таҷрибаҳои минбаъда.

5 × Mix Direct RT: дорои наздикии баланди RNA транскриптазаи Foregene Reverse Transscriptase, RNase Inhibitor, dNTPs, стабилизаторҳо, такмилдиҳандаҳо, оптимизаторҳо ва праймерҳои транскрипсияи баръакс барои ҳамоҳангсозии оптималӣ (Random Primer, Oligo(dT))₁₈Пример).

Foregene Protease Plus II: Дар заминаи буфери лизис, ҳуҷайраҳо барои озод кардани кислотаҳои нуклеинӣ лиз мешаванд.

2 × Mix-Taqman мустақими qPCR: Ин реагент дорои гармии D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl дорад.₂, буфери реаксия, оптимизатори PCR ва стабилизатор.

20 × ROX Reference Dye: Одатан дар асбобҳои пурқувваткунии PCR дар вақти воқеӣ аз ABI, Stratagene ва дигар ширкатҳо истифода мешавад, он барои танзими фарқияти байни қубурҳои PCR ва қубурҳо, ки дар натиҷаи хатогиҳои вояи PCR ба вуҷуд омадаанд, истифода мешавад.Консентратсияи 20× ROX Reference Dye барои асбобҳои гуногун гуногун аст ва корбар метавонад онро мувофиқи консентратсияи тавсияшудаи асбоб илова кунад.

RNase-Free ddH₂O: Оби ултра софи бе стерилизатсияшудаи RNase барои реаксияҳои дуқадамонаи RT-qPCR.

Чораҳои эҳтиеткори:(Боварӣ ҳосил кунед, ки пеш аз истифодаи маҷмӯа чораҳои эҳтиётиро бодиққат хонед)

Ба усули кори таҷриба диққат диҳед, то ифлосшавии байни намунаҳо пешгирӣ карда шавад.

Ба тозагии муҳити озмоишӣ ва асбобҳо диққат диҳед, то ифлосшавии RNase ва таназзули РНК пешгирӣ карда шавад.

Намунаҳои ҳуҷайраҳои тару тоза ё хуб нигоҳ дошташударо гиред ва ҳеҷ гоҳ намунаҳои ҳуҷайраҳои такрории яхкардашударо истифода набаред.

5× Mix Direct qPCR, 2× Direct Mix-Taqman qPCR бояд аз обшавии такрории яхкунӣ худдорӣ кунад, вагарна он ба транскрипсияи баръакс ва самаранокии PCR таъсир мерасонад.

Тайёрӣрационпешамалиёт

Пеш аз истифодаи ин маҷмӯа дастурҳоро бодиққат хонед.Маҷмӯаи Cell Direct RT-qPCR оддӣ, қулай ва зуд кор мекунад ва дастурҳо дар бораи тамоми маҷмӯа ва тарзи дуруст истифода бурдани он маълумоти пурра медиҳанд.Лутфан пеш аз истифода мавод ва таҷҳизоти зарурии таҷрибавӣ омода кунед.

Мавод ва тачхизоти тачрибавй

◆ Ҳуҷайраҳои фарҳангӣ.

◆ 1,5 мл ё 2 мл, найчаи центрифугаи RNase-/DNase-Free, нӯги RNase-/DNase-Free, 0,2 мл найчаи хушкидаи qPCR.

◆ мошини qPCR, пипетка, центрифугаи рӯи миз (≥13,400×ж) (вобаста ба талаботи таҷрибавӣ) ва ғ.

Бехатарӣ

◆ Ин маҳсулот танҳо барои тадқиқоти илмӣ аст, лутфан онро барои мақсадҳои дорусозӣ, клиникӣ, хӯрокворӣ ва косметикӣ истифода набаред.

◆ Ҳангоми истифода бурдани маводи кимиёвӣ, либосҳои лабораторӣ, дастпӯшакҳо, айнакҳои муҳофизатӣ ва ғ.

Амалиётроҳнамоҳо

Системаҳои лизиси ҳуҷайра, системаҳои RT ва бастаҳои иловагии маҳлули реаксияи qPCR метавонанд алоҳида харидорӣ шаванд, барои тафсилот дар Замимаи 1 (САҲИФАИ 13).

Дастури амалиёт

A: Намунаи барориши РНК

1.Ҳуҷайраҳо пешакӣ коркард карда шуданд: Лавҳаи фарҳанги ҳуҷайраро бо PBS хунук бишӯед, сипас ҳуҷайраҳоро лизис кунед (10-10).⁶), 10⁶ аз миқдори ҳуҷайраҳо тавсия дода мешавад, ки барои истихроҷ ва тозакунии РНК маҷмӯаи изолятсияи РНК-и умумии (DE-03111) ё маҷмӯаи изолятсияи RNA Animal Total (DE-03011) тавсия дода мешавад.

1.1.Ҳуҷайраҳои часпида (24-чоҳ ҳамчун мисол)

1.1.1.Шумораи ҳуҷайраҳои ҳар як чоҳро муайян кунед, муайян кунед, ки шумораи ҳуҷайраҳо 1 × 10 аст⁵, ва пипеткаро истифода баред, то муҳити фарҳангиро аз табақи фарҳангӣ хориҷ кунед.

1.1.2.Ба ҳар як чоҳ 200 мкл 1 × PBS-и қаблан хунукшуда илова кунед.Такрори пипета накунед ва PBS-ро аз чоҳҳо хориҷ кунед.Табақро хам кунед ва то ҳадди имкон PBS хориҷ кунед.Ба қадами 2 гузаред.

1.1.3.Табақи гуногуни фарҳанги ҳуҷайра ё ҷадвали рақами истинод 1-1 дар як табақ фарҳанги ҳуҷайра ба 1 × PBS барои шустани ҳуҷайра илова карда шуд.

Ҷадвали 1-1: Микдори PBS барои шумораи гуногуни ҳуҷайраҳо

Шарҳ:Барои таъмини ҳуҷайраҳои пайвастаи устувор,миқдори зиёди талафоти ҳуҷайра ҳангоми шустан пешгирӣ карда мешавад.

1.2.Ҳуҷайраҳои суспензия ё ҳуҷайраҳои часпак, ки дар плитаҳои ғайрипорос парвариш карда мешаванд

1.2.1.Ҳуҷайраҳои часпида, ки дар пластинаҳои ғайримуқаррарӣ парвариш карда шудаанд (ҳуҷайраҳои суспензия аз қадами навбатии 1.2.2 оғоз мешаванд), ҳуҷайраҳоро мувофиқи усули ҷамъоварии муқаррарии ҳуҷайра ҷамъоварӣ ва ҷудо мекунанд ва онҳоро дар табақи фарҳангӣ ё найчаи центрифуга ҷойгир мекунанд;агар трипсинизатсия истифода шавад, барои ҷамъоварӣ кардани ҳуҷайраҳо ва хориҷ кардани трипсин боқимонда центрифугаро талаб кунед, ҳуҷайраҳои дубора боздоштани PBS ба ҳуҷайраҳои алоҳида барои пароканда кардани ҳуҷайраҳо илова карда мешаванд.

1.2.2.Пас аз ҳисоб кардани шумораи ҳуҷайраҳо, ҳуҷайраҳои ҷудошуда 1 × 10⁵ як ба центрифугаи найҳои, ҷамъ ҳуҷайраҳои тавассути центрифуга дар 1000 × г барои 10 дақиқа.

1.2.3.Ба найчаи центрифуга 200 мкл PBS илова кунед, такроран пипета назанед ва бевосита PBS-ро аспира кунед.ба қадами 2 гузаред. (Агар боришот душвор бошад ва ҳуҷайраҳо дубора барқарор карда шаванд, мумкин аст, ки 1000 × г центрифугаро 10 дақиқа пас аз партофтани супернатант иҷро кунед, pellet ҳуҷайра ба қадами 2 мегузарад)

2.Лизиси ҳуҷайра: Хориҷ буфери CL, ҳарорати он ба ҳарорати хонагӣ мувозинат, DNA Eraser ва Foregene Protease Plus II, мувофиқи ҷадвали зерин 1-2 системаи лизиси омодашуда: (Махлули Lysis барои истифода омода аст).

Љадвали 1-2: људошавї омодасозии система (Эзоҳ: дар омодагӣ дар ях)

3.( Пластинкаи 24-чоҳ ҳамчун мисол ) Пипетка 200 мкл лизи асосии ҳуҷайраро ба ҳар як чоҳ пошед, 5-10 маротиба такрор кунед, дар ҳарорати хонагӣ (20-25 ℃) барои 5 дақиқа инкуб кунед.

Шарҳ:Барои роҳ надодан ба ташаккули футурҳо, лутфан вақте ки миқёси пипеткаҳо ба 200 мкл ё камтар танзим карда шуд.Пас аз лизис ҳуҷайраҳо метавонанд абрнок шаванд, ки ин муқаррарӣ аст.

4.(Политаи 24-чоҳ ҳамчун мисол) ба моеъ 20 мкл Buffer ST илова карда мешавад (системаҳои гуногуни лизиси Buffer ST ба миқдори дар ҷадвали 1-3 нишон додашуда илова карда шудааст), 5-10 маротиба пиптингҳои такрорӣ, дар ҳарорати хонагӣ (20-25 ℃) барои 2 дақиқа инкубатсия карда шуданд.

Шарҳ:Нӯги пипетка дар зери сатҳ ҷойгир карда шуд, ки лизат илова карда шавад,барои пешгирӣ кардани пайдоиши футур, лутфан вақте ки миқёси пипетка ба 200 мкл ё камтар танзим карда шуд.

Ҷадвали 1-3:Иловаи буфери ST

5.Лизат барои таҷрибаҳои минбаъдаи RT-qPCR истифода мешавад.Агар таҷрибаҳои минбаъда сари вақт гузаронида нашаванд, лутфан онро дар болои ях на бештар аз 2 соат нигоҳ доред ва дар -20 ℃ ё -80 ℃ (на бештар аз се моҳ) нигоҳ доред.

B: Омодасозии системаи RT

1.5 × Direct Mix RT Mix-ро берун кунед ва онро дар ваннаи ях ҷойгир кунед, бигзор он ба таври табиӣ гудохта шавад ва барои истифодаи минбаъда бо нарм омехта кунед;RNase-Free ddH2O-ро берун кунед ва онро гудохта, дар ваннаи ях барои истифодаи минбаъда ҷойгир кунед.Системаи реаксияро дар рӯи ях мувофиқи ҷадвали 2-1 дар поён омода кунед.

Љадвали 2-1: Омодасозии системаи реаксияи ЉТ

2.After ба итмом расонидани формулаи система, хушхӯю омехта ва центрифуга дар ҷадвали зерин мухтасар 2 -2 шароити реаксия реаксияи ҶТ.

Ҷадвали 2-2: Танзими ҳолати реаксияи ҶТ

3. Пас аз ба итмом расидани реаксия, маҳсулоти реаксия мустақиман ба ях барои qPCR гузошта шуд, лутфан нигоҳдории дарозмуддат -20 ℃ ё -80 ℃ гузоред.

Эзоҳ: Аз сабаби истифодаи қолаби тозанашуда, дар маҳсулоти транскрипсияи баръакс боришотҳои сафед пайдо мешаванд.Ин як падидаи муқаррарӣ аст.Барои таҷрибаҳои минбаъда фавран супернатантро центрифуга кунед.

Маҳлули реаксияи RT ба системаҳои реаксияи навбатии Қадами Real Time PCR илова карда мешавад, тавсия дода мешавад, ки миқдори аз 10-30% системаи реаксия илова карда шавад.

C: омодасозии системаи реаксияи qPCR

1. Миқдори мувофиқи В дар қолаби қадами cDNA мувофиқи ҷадвали 3-1 барои омода кардани системаи реаксия омода карда шудааст.

Эзоҳ: Миқдори қолаби cDNA 10-30% системаи qPCR-ро ташкил медиҳад.Масалан, дар системаи 20μl qPCR, 2-6 мкл буфери лизис илова кунед, аммо на бештар аз 6 мкл.

2. Оптимизатсияи шароити хуби qPCR (Ҳарорати гармкунӣ， ва ғ.) барои реаксияи qPCR (Шартҳои реаксия дар ҷадвали 3-2 оварда шудаанд).

Эзоҳ: Кӯшиш кунед, ки шароити оптимизатсияшуда барои аксуламалҳои qPCR барои ба даст овардани натиҷаҳои беҳтар истифода баред.

Љадвали 3-1: Омодасозии системаи реаксияи ПТР

1*: Консентратсияи праймерро дар доираи 50-900 нМ танзим кардан мумкин аст, вақте ки иҷрои реаксияи праймер суст аст.

Эзоҳ: Системаи qPCR-ро мувофиқи ниёзҳои таҷрибавӣ ва модели сикли флуоресцентӣ танзим кардан мумкин аст.Барои qPCR дар 50μl системаи, вояи реагентро мутаносибан мувофиқи 20 танзим кунедμл система.

2*: Консентратсияи ниҳоии мувофиқи рангҳои ROX Reference Dye-ро мувофиқи сикли гармии флуоресцентӣ интихоб кунед.Консентратсияи аз ҳама мувофиқи ROX Reference Dye барои сиклҳои миқдории флуоресцентӣ дар ҷадвали зер нишон дода шудаанд:

Љадвали 3-2: шароити реаксияи qPCR оварда шудааст

Эзоҳ: Барои ба даст овардани беҳтарин эффекти qPCR, PCR-и градиентиро барои оптимизатсия кардани шароити реаксия барои қолабҳои гуногун ва праймерҳои гуногун истифода бурдан мумкин аст.Шароити реаксияи PCR вобаста ба анализатори флуоресцентӣ, қолаб, праймер ва ғайра фарқ мекунад. Дар амалиёти мушаххас, шароити оптималии реаксия бояд мувофиқи шароити мушаххаси циклери гармии миқдории флуоресцентӣ, навъи қолаб, андозаи порчаи таваҷҷӯҳ, пайдарпаии асосии порчаи пурқувватшуда ва GC, мӯҳтаво ва дарозии ҳарорати реаксия ва ғайра тарҳрезӣ карда шавад.

Принсипҳои тарроҳии праймери PCR дар вақти воқеӣ

Праймери пеш ва праймери баръакс

Барои PCR Real Time тарҳрезии праймер хеле муҳим аст.Примерҳо ба хусусият ва самаранокии пурқувваткунии PCR алоқаманданд ва метавонанд бо истинод ба принсипҳои зерин тарҳрезӣ шаванд:

◆ Дарозии Primer: 18-30bp.

◆ Мазмуни GC: 40-60%.

◆ Арзиши Tm: Нармафзори тарҳрезии Primer, ба монанди Primer 5, метавонад арзиши Tm-и праймерро диҳад.Қиматҳои Tm-и праймерҳои боло ва поён бояд ба қадри имкон наздик бошанд.Формулаи ҳисобкунии Tm низ метавонад истифода шавад: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Ҳангоми иҷрои ПЗР, одатан ҳамчун ҳарорати гармкунӣ ҳарорат аз арзиши ибтидоии Tm аз 5 °C интихоб карда мешавад (афзоиши мувофиқ дар ҳарорати гармкунӣ метавонад хусусияти реаксияи ПЗР-ро зиёд кунад).

◆ Примерҳо ва маҳсулоти PCR:

◆ Тарҳрезии праймер, дарозии маҳсулоти пурқувваткунандаи PCR беҳтараш 100-150б.

◆ Тарҳрезии праймерҳо дар минтақаи дуюмдараҷаи сохтории қолаб бояд то ҳадди имкон пешгирӣ карда шавад.

◆ Аз ташаккули 2 ё зиёда пойгоҳҳои иловагӣ дар байни 3′-охири праймерҳои болооб ва поёноб канорагирӣ кунед.

◆ Пойгоҳи терминали Primer 3' наметавонад бо 3 пайдарпайи G ё C мавҷуд бошад.

◆ Худи праймерҳо наметавонанд сохторҳои иловагиро дошта бошанд, вагарна сохтори мӯй ба вуҷуд меояд, ки ба тақвияти PCR таъсир мерасонад.

◆ ATCG бояд ба қадри имкон дар пайдарпаии ибтидоӣ тақсим карда шавад ва пойгоҳи терминали 3' бояд ҳамчун T пешгирӣ карда шавад.

Замима1:Cell DirectRT-qPCR Маҷмӯаи компонентт бастаи иловагӣ

1. Маҳлули лизиси ҳуҷайра