Маҷмӯаи изолятсияи ДНК-и Swab/FTA Маҷмӯаи истихроҷ ё тозакунии ДНК аз тампонҳои Buccal
Тавсифи маҷмӯа:
ДНК-и геномии баландсифатро аз тампончаи бука/намунаҳои корти FTA зуд тоза кунед.
◮Не ифлосшавии RNase:Сутуни танҳо ДНК, ки маҷмӯа пешниҳод кардааст, имкон медиҳад, ки РНК аз ДНК-и геномӣ бидуни илова RNase ҳангоми таҷриба хориҷ карда шавад ва лабораторияро аз олуда шудани RNase экзогенӣ пешгирӣ кунад.
◮Суръати тез:Foregene Protease нисбат ба протеазаҳои шабеҳ фаъолияти баландтар дорад ва намунаҳои бофтаро зуд ҳазм мекунад;амалиёт оддӣ аст ва амалиёти истихроҷи ДНК-и геномӣ метавонад дар давоми 20-80 дақиқа анҷом дода шавад.
◮Қулай:Сентрифугакунӣ дар ҳарорати хонагӣ анҷом дода мешавад ва барои центрифуга дар ҳарорати пасти 4°C ё боришоти этанол аз ДНК лозим нест.
◮Бехатарӣ:Истеҳсоли реагентҳои органикӣ талаб карда намешавад.
◮Сифати баланд:ДНК-и геномии истихроҷшуда пораҳои калон дорад, РНК надорад, RNase надорад ва миқдори ионҳои ниҳоят паст дорад, ки ба талаботи таҷрибаҳои гуногун ҷавобгӯ буда метавонанд.
◮Системаи микроэлютсионӣ:Он метавонад консентратсияи ДНК-и геномиро афзоиш диҳад, ки барои ошкор ё озмоиши поёноб қулай аст.
Тавсифи
Ин маҷмӯа усули муассир ва зуд барои ба даст овардани ДНК-и геномии консентратсияи баландро аз тампонҳои бука ва Card FTA (доғҳои хун) таъмин мекунад.Истифодаи ширкати мо'Сутун ва формулаи ягонаи чархзании мембранаи кремнийи танҳо ДНК, дар якҷоягӣ бо Foregene Protease, ДНК-и геномии консентратсияи баланд ва сифати баландро дар 80 дақиқа истихроҷ кардан мумкин аст.Сутуни тозакунии хурди махсус тарҳрезишуда ДНК-и геномиро мепайвандад ва ДНК-ро бо миқдори ками холӣ кардан мумкин аст (15μl) системаи элюционӣ барои баланд бардоштани консентратсияи ДНК-и геномии ба даст овардашуда, ки барои ошкор ё таҷриба дар поёноб мувофиқ аст.Маҷмӯа метавонад дар як вақт як ё якчанд намунаро коркард кунад ва раванди поксозӣ истихроҷи моддаҳои органикӣ ба монанди фенол, хлороформ ва боришоти изопропанол ё этанолро талаб намекунад ва амалиёт оддӣ ва сарфаи вақт аст.
Мушаххасоти
50 Тайёрӣ
Компонентҳои комплект
| Буфери ST1 |
| Буфери ST2 |
| Акриламиди хатӣ |
| Буфери PW |
| Буфери ВБ |
| Буфер EB |
| Протеазаи Форген |
| Фақат сутуни ДНК |
| Дастурҳо |
Хусусиятҳо ва афзалиятҳо
-Нифлосшавии RNase нест: Сутуни танҳо барои ДНК, ки маҷмӯа пешниҳод кардааст, имкон медиҳад, ки РНК аз ДНК-и геномӣ бе илова кардани RNase дар давоми озмоиш хориҷ карда шавад ва лабораторияро аз олуда шудани RNase экзогенӣ пешгирӣ кунад.
-Суръати тез: Foregene Protease нисбат ба протеазаҳои шабеҳ фаъолияти баландтар дорад, намунаҳоро зуд ҳазм мекунад;амалиёти оддӣ.
-Мувофиқ: Сентрифуга дар ҳарорати хонагӣ анҷом дода мешавад ва барои центрифуга дар ҳарорати пасти 4°C ё боришоти этаноли ДНК лозим нест.
-Бехатарӣ: истихроҷи реагенти органикӣ талаб карда намешавад.
-Сифати баланд: ДНК-и геномии истихроҷшуда дорои порчаҳои калон, РНК, RNase ва мундариҷаи бениҳоят пасти ионҳо мебошад, ки метавонанд ба талаботи таҷрибаҳои гуногун ҷавобгӯ бошанд.
-Системаи микроэлюсия: Он метавонад консентратсияи ДНК-и геномиро афзоиш диҳад, ки барои ошкор ё таҷриба дар поёноб мувофиқ аст.
Аризаи маҷмӯа
Он барои тоза кардани ДНК-и геномӣ аз намунаҳои зерин мувофиқ аст: тампонҳои бука, Card FTA (доғҳои хун).
Нигоҳдорӣ ва мӯҳлати нигоҳдорӣ
-Ин маҷмӯаро дар шароити хушк дар ҳарорати хонагӣ (15-25°С) барои 12 моҳ нигоҳ доштан мумкин аст;агар онро муддати дарозтар нигох доштан лозим бошад, онро дар харорати 2—8°С нигох доштан мумкин аст.
Эзоҳ: Агар дар ҳарорати паст нигоҳ дошта шавад, маҳлул ба боришот моил аст.Пеш аз истифода, боварӣ ҳосил кунед, ки маҳлулро дар маҷмӯа дар ҳарорати хонагӣ барои муддати муайян ҷойгир кунед.Агар лозим бошад, онро дар ваннаи обии 37°С дар давоми 10 дақиқа пеш гарм кунед, то боришот ҳал шавад ва пеш аз истифода онро омехта кунед.
-Махлули Foregene Protease дорои формулаи беназир аст, ки он дар ҳарорати хонагӣ муддати тӯлонӣ (3 моҳ) нигоҳ дошта мешавад;фаъолият ва устувории он дар ҳарорати 4°C нигоҳ доштан беҳтар мешавад, бинобар ин тавсия дода мешавад, ки онро дар ҳарорати 4°С нигоҳ доред, фаромӯш накунед, ки онро дар -20°С нигоҳ доред.
Сутуни тозакунӣ баста шудааст
Дар ин маҷмӯа, дар амалиёти истихроҷи ДНК-и геномӣ, сутуни тозакунӣ мустақиман ба омехтаи лизиси ферментативии намуна бидуни қадами центрифугакунӣ адсорб мешавад ва сутуни тозакунӣ аз сабаби ферментизатсияи нопурра ва часпакии баланди намуна метавонад баста шавад.
Сабабҳои эҳтимолии зерин инҳоянд:
1. Ҳазми нопурраи ферментативии намунаҳои бофтаҳо.
Тавсия: Вақти коркарди намунаи Foregene Protease метавонад ба таври мувофиқ дароз карда шавад ё супернатантро пас аз центрифуга дар 12,000 чархзанӣ (~13,400 × г) барои 5 дақиқа гирифтан мумкин аст.
2. Истифодаи аз ҳад зиёди намунаҳои бофтаҳо ё бофтаҳои калон.
Тавсия: Беҳтар аст, ки дар намуна аз 1 тампончаи Buccal зиёд набошад;агар намуна аз ҳад зиёд калон бошад, мутаносибан миқдори Buffer ST1, Foregene Protease, буфери ST2-ро зиёд кунед.
3. Часпакнокии намуна хеле баланд аст.
Тавсия: Намунаҳоро пеш аз истихроҷи ДНК-и геномӣ бо 10 мм Tris-HCl ба таври мувофиқ ҳал кардан мумкин аст.
4. Порчаҳои корти хун макканда шудаанд.
Тавсия: Вақти муваққатии центрифугакунии марҳилаи 6-и истихроҷи геномии доғи хун (FTA Card) метавонад ба таври мувофиқ дароз карда шавад.
Ҳосили паст ё набудани ДНК
Аксар вақт омилҳои мухталифе мавҷуданд, ки ба ҳосили геномии ДНК таъсир мерасонанд, аз ҷумла пайдоиши намуна, шароити нигоҳдории намуна, тайёр кардани намуна, коркард ва ғайра.
Ҳангоми истихроҷ ДНК-и геномиро ба даст овардан мумкин нест
Сабабҳои эҳтимолӣ инҳоянд:
1. Нигоҳдории нодурусти намунаҳо ё нигоҳдории аз ҳад зиёд ба таназзули геномии ДНК оварда мерасонад.
Тавсия: Тампонҳои шифоҳӣ бояд беҳтараш нав гирифта шаванд ва истифодаи тампонҳои ҳифзшуда барои амалиёти истихроҷи геномии ДНК тавсия дода намешавад;намунаҳои доғи хун бояд кафолат диҳанд, ки сифат мувофиқ аст ва мӯҳлати нигоҳдорӣ набояд аз ҳад зиёд дароз бошад.
2. Истифодаи хеле ками матоъ метавонад боиси истихроҷи ДНК-и геномии мувофиқ гардад.
Тавсия: Дастурҳои оид ба гирифтани намунаи тампончаи гадуди зери меъдаро дар дастури амалиёт иҷро кунед ва ҳарчи бештари имкон тоза кунед, то ҳуҷайраҳои кофӣ ба тампони даҳон барои истихроҷи геномии ДНК часпонида шаванд;барои истихроҷи намунаи доғи хун, майдони буридани доғи хунро ба таври мувофиқ зиёд кардан мумкин аст.
3. Foregene Protease нодуруст нигоҳ дошта мешавад, ки дар натиҷа фаъолияти он коҳиш меёбад ё ғайрифаъол мешавад.
Тавсия: Шароити нигоҳдории Foregene Protease-ро тасдиқ кунед ё онро бо протеазаи нави Foregene Protease барои реаксияи ферментативӣ иваз кунед.
4. Нигоҳдории нодурусти маҷмӯа ё вақти нигоҳдорӣ хеле тӯлонӣ аст, ки дар натиҷа баъзе ҷузъҳои комплект аз кор мебароянд.
Тавсия: Маҷмӯаи нави изолятсияи ДНК-и тампон аз Buccal барои расмиёти алоқаманд харед.
5. Буфери БҶ этаноли мутлақ илова намекунад.
Тавсия: Тасдиқ кунед, ки буфери БҶ ҳаҷми дурусти этаноли мутлақро илова мекунад.
6. Элюент ба плёнкаи силикон дуруст илова карда нашудааст.
Тавсия: Ба мобайни мембранаи силикон қатраҳои элюенти қаблан гармшудаи 65 °C илова кунед ва дар ҳарорати хонагӣ барои 5 дақиқа гузоред, то ки самаранокии элюсия баланд шавад.
ДНК-и геномии кам ҳосили ҷудошуда
Сабабҳои эҳтимолии зерин инҳоянд:
1. Нигоҳдории нодурусти намунаҳо ё нигоҳдории аз ҳад зиёд ба таназзули геномии ДНК оварда мерасонад.
Тавсия: Тампонҳои шифоҳӣ беҳтар намунаи нав гирифта мешаванд ва тампонҳои ҳифзшуда набояд барои истихроҷи геномии ДНК истифода шаванд.
2. Агар миқдори намунаи бофта хеле кам бошад, мундариҷаи ДНК-и геномии истихроҷшуда камтар хоҳад буд.
Тавсия: Дастурҳои гирифтани намунаи тампони шифоҳиро дар дастури амалиёт иҷро кунед ва ҳарчи бештари имкон тоза кунед, то ҳуҷайраҳои кофӣ ба тампони даҳон барои истихроҷи геномии ДНК часпонида шаванд.
3. Foregene Protease нодуруст нигоҳ дошта мешавад, ки дар натиҷа фаъолияти он коҳиш меёбад ё ғайрифаъол мешавад.
Тавсия: Шароити нигоҳдории Foregene Protease-ро тасдиқ кунед ё онро бо протеазаи нави Foregene Protease барои реаксияи ферментативӣ иваз кунед.
4. Мушкилоти элуент.
Тавсия: Истифодаи Buffer EB барои элюсия;агар истифодаи ddH2Эй ё дигар элюентҳо, тасдиқ кунед, ки рН-и элюат байни 7,0-8,5 аст.
5. Элюат ба қатра дуруст илова карда нашудааст.
Тавсия: Қатраҳои элюентро ба мобайни мембранаи силикон илова кунед ва дар ҳарорати хонагӣ барои 5 дақиқа тарк кунед, то ки самаранокии элюсия баланд шавад.
6. Моеъи элютсионӣ хеле кам ҷамъ мешавад.
Тавсия: Элюентро барои элюсияи геномии ДНК мувофиқи дастурҳо, ҳадди аққал на камтар аз 15 мкл истифода баред.
Покии пасти ДНК-и геномии ҷудошуда
Покии пасти геномии ДНК метавонад ба нокомӣ ё натиҷаҳои ғайриқаноатбахши таҷрибаҳои поёноб оварда расонад, масалан: ферментҳоро кушода наметавонанд, PCR порчаи гени мавриди таваҷҷӯҳро ба даст оварда наметавонад ва ғайра.
Сабабҳои эҳтимолӣ инҳоянд:
1. Ифлосшавии гетеропротеинҳо, ифлосшавии РНК.
Таҳлил: Сутуни тозакунӣ бо истифода аз Buffer PW шуста нашудааст;сутуни шустани буферии PW бо истифода аз суръати дурусти центрифуга шуста нашудааст.
Тавсия: Боварӣ ҳосил кунед, ки пеш аз илова кардани этанол дар супернатант ҳеҷ гуна боришот нест;боварӣ ҳосил кунед, ки сутуни тозакуниро мувофиқи дастурҳо бишӯед ва ин қадамро партофтан мумкин нест.
2. ифлосшавии ионҳои наҷосат.
Таҳлил: Сутуни шустани буферии БҶ танҳо як маротиба хориҷ карда шуд ё шуста шуд, ки дар натиҷа олудашавии боқимондаи ионӣ шуд.
Тавсия: Боварӣ ҳосил кунед, ки Buffer WB-ро 2 маротиба шуста, то ҳадди имкон ионҳои боқимондаро тоза кунед.
3. Ифлосшавии ферментҳои РНК.
Таҳлил: RNases хориҷӣ ба буфер илова карда шуданд;Амали шустани буферии PW нодуруст буд, ки дар натиҷа боқимондаҳои RNase ба амал омада, ба амалиёти таҷрибавии РНК дар поёноб, ба монанди транскрипсияи in vitro, таъсир расониданд.
Тавсия: Маҷмӯаҳои изолятсияи кислотаи нуклеинӣ барои силсилаи Foregene метавонанд РНК-ро бе иловаи иловагии RNase хориҷ кунанд, аз ин рӯ маҷмӯаи изолятсияи DNA Swab/FTA набояд RNase илова кунад;итминон ҳосил кунед, ки дастурҳои сутуни тозакунии шустани буферии PW-ро риоя кунед ва ин қадамро фаромӯш кардан мумкин нест.
4. Бақияи этанол.
Таҳлил: Буфери ВБ пас аз шустани сутуни тозакунӣ центрифугаи холии найро анҷом надодааст.
Тавсия: Амалиёти дурусти центрифугакунии найчаи холиро мувофиқи дастурҳо иҷро кунед.
5. Дигар ифлосшавии наҷосат.
Таҳлил: Намунаҳои захирашуда ё намунаҳои махсус коркард карда намешаванд.
Тавсия: Намунаро мувофиқи дастур пешакӣ бодиққат коркард кунед.
