Маҷмӯаи мустақими RT-qPCR III
Тавсифи маҷмӯа:
◮Маҷмӯаи мустақими RT-qPCR бо истифода аз Foreasy Reverse Transscriptase ва Foreasy HS Taq DNA Polymerase, ки аз ҷониби Foregene таҳия шудааст, бо буфери беназири реаксия, ин маҷмӯаро бо муқовимати қавӣ ва мутобиқати он месозад ва он метавонад мустақиман реаксияро истифода аз системаи Foregene Lysis ҳамчун қолаб озмоиш кунад.Ин маҷмӯа метавонад барои таҳияи маҷмӯаи кашфи кислотаи нуклеинӣ COVID-19 ва дигар бактерияҳои патогенӣ барои таҳияи маҷмӯаи муайянкунии кислотаи нуклеинӣ муроҷиат кунад.
Тавсифи
Маҷмӯаи мустақими RT-qPCR буфери алоҳида бастабандишудаи RT-qPCR (бо полимеразаи Foreasy HS Taq DNA омехта) ва самаранокии баландро таъмин мекунад.Транскриптазаи баръакс (MMLV),онро барои эҷоди маҷмӯаҳои пушти сар ва танзими система, дар доираи санҷиши оддӣ қулай мегардонад.
Маҷмӯаи мустақими RT-qPCR бо истифода аз Foreasy Reverse Transscriptase ва Foreasy HS Taq DNA Polymerase, ки аз ҷониби Foregene таҳия шудааст, бо буфери беназири реаксия, ин маҷмӯаро бо муқовимати қавӣ ва мутобиқати он месозад ва он метавонад мустақиман реаксияро истифода аз системаи Foregene Lysis ҳамчун қолаб озмоиш кунад.Ин маҷмӯа метавонад барои таҳияи маҷмӯаи кашфи кислотаи нуклеинӣ COVID-19 ва дигар бактерияҳои патогенӣ барои таҳияи маҷмӯаи муайянкунии кислотаи нуклеинӣ муроҷиат кунад.
Ин маҷмӯа метавонад бевосита ҷузъи маҳсулоти IVD бошад, бо истифода аз осон ва зуд.Он танҳо ба тафтиши осон ниёз дорад, бидуни таҳияи дубора.
Мушаххасоти
500Т, 50000Т
Компонентҳои комплект
| Мундариҷаи маҷмӯа (Системаи реаксия 20 μL) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 Т | 50 000 Т | |
| Пешгӯӣ РТранскриптаза(200 U/μL) | 50 мкл×1 | 1 мл×5 |
| 2 × qPCR мустақимМикс-Тақман | 1 мл × 5 | 500 мл×1 |
| Дастур | 1 | 1 |
Қадамҳои амалиёт
A: Шаблон ва реактивро тайёр кунед
1. Шаблони омодашудаи RNA (Маҷмӯаи силсилаи Foregene Total RNA Isolation Kit барои истихроҷ ва тоза кардани қолаби RNA тавсия дода мешавад) ё маҳсулоти крекинги намуна (Истифодаи системаи Foregene Lysis тавсия дода мешавад), праймерҳои мушаххас (10 мкМ) ва дигар масолеҳи зарурӣ, асбобро омода кунед.
2. Буфери 2× Direct RT-qPCR, RNase-Free ddH2O ва 20× ROX Reference Dye (агар лозим бошад) ба қуттии бо ях гузоред, онҳоро табиатан гудохта, нарм омехта кунед.
B: Омода кардани системаи RT-qPCR
Нисфи ҳаҷми буфери реаксияи системаи реаксияро гиред (масалан, агар ҳаҷми система 20 мкл бошад, он бояд 10 мкл 2 × Direct RT-qPCR Buffer гирад.). Бароимиқдори мувофиқи фермент, мо таклиф мекунемM-MLV: Системаи реаксияи 10-30 U/20 μL,ТакДНК полимераза:Системаи реаксияи 1-2 U/20 μLин пешниҳоди мост, шумо бояд онро санҷед ва танзим кунед), Шаблони РНК, праймерҳо ва зондҳои мушаххасро илова кунед ва RNase-Free ddH илова кунед2О ба 20 мкл.Омодасозии мушаххаси системаи реаксияи RT-qPCR метавонад ба ҷадвали зерини 1 ишора карда шавад.
Ҷадвали 1: Омода кардани системаи RT-qPCR
| Компонент | Ҳаҷм | Консентратсияи ниҳоӣ |
| 2 × Буфери мустақими RT-qPCR | 10 мкл | 1× |
| Транскриптазаи пешина (MMLV) | 10-30 У | |
| Foreasy HS Taq DNA Polimerase | 1-2 У | |
| Примери пеш (10 μM) | 0,8 мкл | 50-900нМ |
| Примери баръакс (10 мкм) | 0,8 мкл | 50-900нМ |
| Зонд (4 мкм) | 1 мкл | 200нМ |
| Шаблон (РНК ё Лизат) | X мкл | |
| 20 × Ранги истинод ROX | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) мкл | |
| Ҳаҷми умумӣ | 20 мкл |
Эзоҳ: Primer Forward ва Reverse Primer праймерҳои мушаххаси гени мақсаднок мебошанд.Системаи qPCR метавонад мувофиқи моделҳои амалии таҷрибавӣ ва PCR танзим карда шавад.Мо барои консентратсияи ниҳоии аксари праймерҳо 400 нМ тавсия медиҳем.Лутфан, ҳаҷми праймерҳо ва зондҳои мушаххасро мувофиқи консентратсияи омодашуда ва консентратсияи ниҳоии тавсияшуда танзим кунед.
1*: Консентратсияи ниҳоии мувофиқи рангҳои ROX Reference Dye-ро мувофиқи асбобҳои гуногуни PCR-и миқдорӣ интихоб кунед.Консентратсияи оптималии ROX Reference Dye барои асбобҳои маъмулии миқдорӣ ПЗР дар ҷадвали зерин нишон дода шудааст:
| Асбобҳои миқдории PCR | Консентратсияи ниҳоии ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Қадами Якум,ва гайра. | 1× (масалан, 1μl 20×ROX Reference Dye дар системаи реаксияи 20 μL илова кунед) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P ва Mx4000 ва ғайра. | 0,5× (масалан, 0,5μl 20×ROX Reference Dye дар системаи реаксияи 20 μL илова кунед) |
| Асбоби PCR Roche, асбоби Bio-Rad PCR, асбоби миқдорӣ PCR Eppendorf ва ғайра. | Бе Ранг Reference ROX |
Нигоҳдорӣ ва мӯҳлати нигоҳдорӣ
Маҷмӯа бояд дар -20 ± 5 ℃ нигоҳ дошта шавад.Он бояд фавран дар яхдон -20 ℃ термостатикӣ нигоҳ дошта шавад.Мӯҳлати амали он 2 сол аст, агар он дар ҳолати мувофиқ нигоҳ дошта шавад.
