Сигналҳои пурқувват нест

1.Polymerase Taq DNA дар маҷмӯа фаъолияти худро аз сабаби нигоҳдории нодуруст ё гузаштани мӯҳлати он аз даст медиҳад.
Тавсия: Шароити нигоҳдории маҷмӯаро тасдиқ кунед;ба системаи PCR миқдори мувофиқи Taq DNA Polymerase аз нав илова кунед ё маҷмӯаи нави PCR дар вақти воқеӣ барои таҷрибаҳои алоқаманд харед.

2.Дар қолаби ДНК ингибиторҳои Taq DNA Polymerase мавҷуданд.
Пешниҳод: Шаблонро аз нав тоза кунед ё миқдори қолаби истифодашударо кам кунед.

3. Консентратсияи Mg2+ мувофиқ нест.
Тавсия: Консентратсияи Mg2+-и омехтаи 2× воқеии PCR, ки мо пешниҳод мекунем, 3,5 мм аст.Аммо, барои баъзе праймерҳо ва қолибҳои махсус, консентратсияи Mg2+ метавонад баландтар бошад.Аз ин рӯ, шумо метавонед мустақиман MgCl2-ро барои оптимизатсияи консентратсияи Mg2 + илова кунед.Тавсия дода мешавад, ки Mg2+ 0,5 мм ҳар дафъа барои оптимизатсия зиёд карда шавад.

4.Шартҳои тақвияти PCR мувофиқ нестанд ва пайдарпаӣ ё консентратсияи ибтидоӣ номувофиқ аст.
Пешниҳод: дурустии пайдарпаии ибтидоиро тасдиқ кунед ва праймер вайрон нашудааст;агар сигнали пурқувваткунӣ хуб набошад, кӯшиш кунед, ки ҳарорати гармкуниро паст кунед ва консентратсияи праймерро ба таври мувофиқ танзим кунед.

5.Маблағи шаблон хеле кам ё аз ҳад зиёд аст.
Тавсия: Гузаронидани градиенти хаттӣ дар қолабро иҷро кунед ва консентратсияи қолабро бо беҳтарин эффекти PCR барои озмоиши PCR дар вақти воқеӣ интихоб кунед.

NTC дорои арзиши флуоресценти хеле баланд аст

1.Ифлосшавии реагентҳо, ки ҳангоми амалиёт ба вуҷуд омадаанд.
Тавсия: Бо реагентҳои нав барои таҷрибаҳои PCR дар вақти воқеӣ иваз кунед.

2.Ифлосшавӣ ҳангоми тайёр кардани системаи реаксияи PCR ба амал омад.
Тавсия: Андешидани чораҳои муҳофизатӣ ҳангоми кор, аз қабили: пӯшидани дастпӯшакҳои латексӣ, истифодаи нӯги пипетка бо филтр ва ғайра.

3.Праймерҳо таназзул мешаванд ва таназзули праймерҳо боиси амплификацияи ғайримахсус мегардад.
Пешниҳод: электрофорези SDS-PAGE-ро барои муайян кардани вайрон шудани праймерҳо истифода баред ва онҳоро бо праймерҳои нав барои таҷрибаҳои PCR дар вақти воқеӣ иваз кунед.

Димери ибтидоӣ ё амплификацияи ғайримуқаррарӣ

1. Консентратсияи Mg2+ мувофиқ нест.
Тавсия: Консентратсияи Mg2+ 2× Real PCR EasyTM Mix, ки мо пешниҳод мекунем, 3,5 мм аст.Аммо, барои баъзе праймерҳо ва қолибҳои махсус, консентратсияи Mg2+ метавонад баландтар бошад.Аз ин рӯ, шумо метавонед мустақиман MgCl2-ро барои оптимизатсияи консентратсияи Mg2 + илова кунед.Тавсия дода мешавад, ки Mg2+ 0,5 мм ҳар дафъа барои оптимизатсия зиёд карда шавад.

2.Дар ҳарорати annealing PCR хеле паст аст.
Пешниҳод: Ҳар дафъа ҳарорати гармкунии PCR-ро то 1℃ ё 2℃ зиёд кунед.

3.Маҳсулоти PCR хеле дароз аст.
Тавсия: Дарозии маҳсулоти PCR дар вақти воқеӣ бояд дар байни 100-150 бит, на бештар аз 500 бит бошад.

4.Праймерҳо хароб мешаванд ва таназзули праймерҳо ба пайдоиши амплификацияи мушаххас оварда мерасонад.
Пешниҳод: электрофорези SDS-PAGE-ро барои муайян кардани вайрон шудани праймерҳо истифода баред ва онҳоро бо праймерҳои нав барои таҷрибаҳои PCR дар вақти воқеӣ иваз кунед.

5.Системаи PCR нодуруст аст, ё система хеле хурд аст.
Пешниҳод: Системаи реаксияи PCR хеле хурд аст, ки дақиқии муайянкуниро коҳиш медиҳад.Беҳтар аст, ки системаи реаксияе, ки аз ҷониби асбоби миқдорӣ ПЗР тавсия шудааст, барои дубора иҷро кардани таҷрибаи PCR дар вақти воқеӣ истифода шавад.

Такрори сусти арзишҳои миқдорӣ

1. Асбоб кор намекунад.
Пешниҳод: Дар байни ҳар як сӯрохии PCR-и асбоб хатогиҳо вуҷуд дошта метавонанд, ки дар натиҷаи идоракунии ҳарорат ё муайянкунӣ қобилияти пасти такрориро ба вуҷуд меорад.Лутфан мувофиқи дастурҳои асбоби мувофиқ санҷед.

2.Тозагии намуна хуб нест.
Тавсия: Намунаҳои нопок боиси паст шудани такроршавандагии таҷриба мегардад, ки тозагии қолаб ва праймерҳоро дар бар мегирад.Беҳтар аст, ки қолабро тоза кунед ва праймерҳо тавассути SDS-PAGE беҳтар тоза карда мешаванд.

3.Мӯҳлати омодасозии системаи PCR ва нигоҳдорӣ хеле дароз аст.
Пешниҳод: Системаи Real Time PCR-ро барои озмоиши PCR фавран пас аз омодагӣ истифода баред ва онро барои муддати тӯлонӣ дар канор нагузоред.

4.Шартҳои тақвияти PCR мувофиқ нестанд ва пайдарпаӣ ё консентратсияи ибтидоӣ номувофиқ аст.
Пешниҳод: дурустии пайдарпаии ибтидоиро тасдиқ кунед ва праймер вайрон нашудааст;агар сигнали пурқувваткунӣ хуб набошад, кӯшиш кунед, ки ҳарорати гармкуниро паст кунед ва консентратсияи праймерро ба таври мувофиқ танзим кунед.

5.Системаи PCR нодуруст аст, ё система хеле хурд аст.
Пешниҳод: Системаи реаксияи PCR хеле хурд аст, ки дақиқии муайянкуниро коҳиш медиҳад.Беҳтар аст, ки системаи реаксияе, ки аз ҷониби асбоби миқдорӣ ПЗР тавсия шудааст, барои дубора иҷро кардани таҷрибаи PCR дар вақти воқеӣ истифода шавад.