(96-чоҳ) Маҷмӯаи QuickEasy Cell Direct RT-qPCR - Taqman
Тавсифҳо
Дар(96-чоҳ) QuickEasyTM Маҷмӯаи Cell Direct RT-qPCR–Такмантаъмин менамоядсистемаи ягонаи буферии лизисto зуд озод кардани РНКаз ҳуҷайраи парваришшуданамунаҳо барои реаксияҳои RT-qPCR, бартараф кардани вақт ва меҳнатталабРаванди тозакунии РНК ва барои ба даст овардани қолаби зарурии РНК ҳамагӣ 7 дақиқа вақтро мегирад.Дар5 × Омехтаи мустақими RTва2 × мустақими qPCR Mix-SYBRки дар куттй дода шудаанд, зуд вамиқдориро дар вақти воқеӣ самаранок ба даст оредНатиҷаҳои PCR.
5× Direct RT Mix ва 2× Direct qPCR Mix-Taqman таҳаммулпазирии қавии ингибиторҳо доранд ва метавонанд лизати намунаро ҳамчун қолаб барои транскрипсияи баръакси муассир ва амплификацияи мушаххас истифода баранд.Реагент дорои Транскриптазаи беҳамтои баръакси Foregene мебошад, ки ба РНК наздикии баланд дорад, инчунин D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl дорад.2 , буфери реаксия, оптимизатори PCR ва stabilizer ва метавонад дар якҷоягӣ бо буфери лизис барои зуд, ба осонӣ ва дақиқ муайян кардани намуна истифода шавад ва он дорои хусусиятҳои ҳассосияти баланд, хосияти қавӣ ва устувории хуб аст.
Маҷмӯа барои лизиси микросистемаи ҳуҷайраҳои 96-хуб парвариш карда шудааст ва якранг ва мувофиқати хуб дорад;ҷузъҳои маҷмӯа 96 реаксияи лизис, 96 реаксияи транскрипсияи баръакс ва реаксияҳои 96 × 2 qPCR-ро таъмин мекунанд, ки метавонанд ба лавҳаи ҳуҷайраҳои 96-чоҳ барои истифодаи якдафъа мувофиқат кунанд ва аз ифлосшавӣ дар натиҷаи кушодани такрорӣ, яхкунӣ ва обшавии реагентҳо ва таназзули кори реагентҳо пешгирӣ кунанд.
Компонентҳои комплект
| Таркиби комплект ( 50 μСистемаи лизиси L/20 мклRT системаи реаксия /20μСистемаи реаксияи L qPCR) | DRT-03021 | Эзоҳ | |
| 96Т | |||
| ҚисмиI | БуферCL | 5 мл | ҲуҷайраЛизис |
| ФориҷӣProtease Plus II | 100 μL | ||
| БуферST | 500 μL | ||
| Қисми II | ДНКХаткӯркунак | 100 μL | |
| 5 × Омехтаи мустақими RT | 400 μL | RT | |
| 2 × Омехтаи мустақими qPCR-Тақман | 1 мL × 2 | qPCR | |
| 50 × Ранги истинод ROX | 400мкЛ | ||
| RNase- ОзодДД2 O | 1,7 мл |
| |
| Mсолона | 1 порча | 1 хизмат | |
*: Реагенти лизиси DNA Eraser ба Қисми II маҷмӯа дохил карда шудааст;Cell Lysis, RT ва qPCR ҷузъҳои алоҳида харидан мумкин аст.
Хусусиятҳо ва афзалиятҳо
■Содда ва самаранок: бо технологияи Cell Direct RT, намунаҳои РНК-ро ҳамагӣ дар 7 дақиқа ба даст овардан мумкин аст.
■ Талаботи намунавӣ хурд аст, то 10 ҳуҷайраро санҷидан мумкин аст.
■ Қобилияти баланд: он метавонад РНК-ро дар ҳуҷайраҳои дар 384, 96, 24, 12, 6-чоҳҳо парваришшуда зуд муайян кунад.
■ DNA Eraser метавонад геномҳои озодшударо зуд тоза кунад ва таъсирро ба натиҷаҳои минбаъдаи таҷрибавӣ хеле кам кунад.
■ Системаи оптимизатсияшудаи RT ва qPCR транскрипсияи баръакси ду марҳилаи RT-PCR-ро самараноктар ва PCR-ро мушаххастар ва ба ингибиторҳои реаксияи RT-qPCR тобовартар мекунад.
Аризаи маҷмӯа
Доираи татбиқ: ҳуҷайраҳои парваришшуда.
- РНК тавассути лизиси намуна бароварда шудааст: танҳо ба қолаби RT-qPCR ин маҷмӯа татбиқ мешавад.
- Маҷмӯаро барои мақсадҳои зерин истифода бурдан мумкин аст: таҳлили ифодаи генҳо, санҷиши таъсири хомӯшкунии генҳои siRNA, скрининги маводи мухаддир ва ғайра.
Нигоҳдорӣ ва мӯҳлати нигоҳдорӣ
Қисми I ин маҷмӯа бояд дар 4 нигоҳ дошта шавад℃;Қисми II бояд дар -20 ℃ нигоҳ дошта шавад.
Foregene Protease Plus II бояд дар 4 дараҷа нигоҳ дошта шавад℃, дар -20 ℃ ях накунед.
Реактив 2×qPCR Mix-Taqman мустақим бояд дар -20 нигоҳ дошта шавад℃дар торикӣ;агар зуд-зуд истифода бурда шавад, он метавонад дар 4 нигоҳ дошта шавад℃ барои нигоҳдории кӯтоҳмуддат (дар давоми 10 рӯз истифода мешавад).
Принсипҳои тарроҳии праймери PCR дар вақти воқеӣ
Праймери пеш ва праймери баръакс
Барои PCR Real Time тарҳрезии праймер хеле муҳим аст.Примерҳо ба хусусият ва самаранокии пурқувваткунии PCR алоқаманданд ва метавонанд бо истинод ба принсипҳои зерин тарҳрезӣ шаванд:
- Дарозии ибтидоӣ: 18-30bp.
- Мазмуни GC: 40-60%.
- Арзиши Tm: Нармафзори тарроҳии Primer, ба монанди Primer 5, метавонад арзиши Tm-и праймерро диҳад.Қиматҳои Tm-и праймерҳои боло ва поён бояд ба қадри имкон наздик бошанд.Формулаи ҳисобкунии Tm низ метавонад истифода шавад: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Ҳангоми иҷрои ПЗР, одатан ҳамчун ҳарорати гармкунӣ ҳарорат аз арзиши ибтидоии Tm аз 5 °C интихоб карда мешавад (афзоиши мувофиқ дар ҳарорати гармкунӣ метавонад хусусияти реаксияи ПЗР-ро зиёд кунад).
- Примерҳо ва маҳсулоти PCR:
- Дарозии маҳсулоти афзояндаи праймери тарроҳии PCR беҳтараш 100-150б.
- Праймерҳои тарроҳӣ дар минтақаи дуюмдараҷаи сохтории қолаб бояд то ҳадди имкон пешгирӣ карда шаванд.
- Аз ташаккули 2 ё зиёда пойгоҳҳои иловагӣ дар байни 3′ охири праймерҳои болооб ва поёноб канорагирӣ кунед.
- Пойгоҳи терминали Primer 3' наметавонад бо 3 пайдарпайи G ё C мавҷуд бошад.
- Худи праймерҳо наметавонанд сохторҳои иловагиро дошта бошанд, вагарна сохтори мӯй ба вуҷуд меояд, ки ба тақвияти PCR таъсир мерасонад.
- ATCG бояд ба қадри имкон дар пайдарпаии ибтидоӣ тақсим карда шавад ва аз пойгоҳи терминали 3' бояд ҳамчун T пешгирӣ карда шавад.
Замима1:Cell DirectRT-qPCR Маҷмӯаи компонентт бастаи иловагӣ
1. Маҳлули лизиси ҳуҷайра
| Маҳлули лизиси ҳуҷайра | |||
| Компонентҳои комплект (24-чоҳ системаи лизис / чоҳ) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Т | 500 Т | ||
| ҚисмиИ | Буфери CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| Буфери ST | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| ҚисмиII | ДНК хаткӯркунак | 400 мкл | 1 мл × 2 |
| RT Mix | |
| Компонентҳои комплект (Системаи реаксия 20 мкл) | DRT-01011-B1 |
| 200 Т | |
| 5 × Омехтаи мустақими RT | 800 мкл |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 мл × 2 |
| qPCR омехта | ||
| Компонентҳои комплект (Системаи реаксия 20 мкл) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 Т | 1000 Т | |
| 2 × мустақими qPCR Mix-Taqman | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 20 × Ранги истинод ROX | 40 мкл | 200 мкл |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 мл | 10 мл |
Дастурҳои дастурӣ:
